缺血后處理對(duì)肝臟冷-熱缺血再灌注損傷及細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分缺血后處理對(duì)肝臟冷/熱缺血再灌注損傷和細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制。 研究目的:探討缺血后處理對(duì)肝臟缺血再灌注損傷和細(xì)胞凋亡保護(hù)作用及其機(jī)制。 研究方法:參照Nauta等所描述的方法建立大鼠部分肝臟30分鐘熱缺血模型，并根據(jù)Kamada等所描述的方法進(jìn)行大鼠肝移植手術(shù)來建立肝臟2小時(shí)冷缺血模型。動(dòng)物分組： 1．Sham組：入腹后僅分離肝十二指腸韌帶，但不阻斷肝門血供； 2．熱缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)2.1

2、 IRI組：?jiǎn)渭?0分鐘熱缺血后灌注，無(wú)其他干預(yù)； 2.2 IPO組：在30分鐘熱缺血后，長(zhǎng)時(shí)間灌注前給予3個(gè)循環(huán)的“30秒灌注-30秒再缺血”缺血后處理； 3．冷缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)3.1 IRI組：供肝2小時(shí)冷缺血后開放血流灌注，無(wú)其他干預(yù)； 3.2 IP0組：在供肝2小時(shí)冷缺血后，受體結(jié)束無(wú)肝期開始長(zhǎng)時(shí)間灌注起始階段，給予3個(gè)循環(huán)的“30秒灌注-30秒再缺血”缺血后處理： 各組在再灌注后3小時(shí)后，采集

3、樣本檢測(cè)血清AST、ALT水平，膽汁葡萄糖含量、GGT水平，肝臟組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變，并采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)含量；采用化學(xué)比色法測(cè)定肝組織中丙二醛(MDA)含量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性；采用免疫組化檢測(cè)檢測(cè)肝細(xì)胞Fas基因的表達(dá)，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。對(duì)同一模型中各組的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比性分析。 研究結(jié)果: 1．

4、在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的ALT和AST水平明顯高于Sham組(P<0.01)，并且IPO組的轉(zhuǎn)氨酶水平低于IRI組(P<0.05)。 2．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的膽汁葡萄糖和GGT水平都高于Sham組(P<0.05)；并且IP0組的膽汁葡萄糖和GGT水平低于IRI組(P<0.05)。 3．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組肝臟組織學(xué)，超微結(jié)構(gòu)改變及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)浸潤(rùn)程度都重

5、于Sham組；但I(xiàn)PO組要輕于IRI組。 4．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的TNF-α和IL-lβ水平明顯高于Sham組(P<0.01)，并且IPO組的TNF-α和IL-1β水平低于IRI組(P(0.05)。 5．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的SOD水平都明顯低于Sham組(P<0.05)；并且IPO組的SOD水平高于IRI組(P(0.05)。而IPO組和IRI組的MDA水平都明顯高于Sha

6、m組(P<0.05)；并且IPO組的MDA水平低于IRI組(P(0.05)。 6．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的肝臟細(xì)胞Fas陽(yáng)性表達(dá)面積百分率都明顯高于Sham組(P<0.01)，并且IPO組的Fas陽(yáng)性表達(dá)面積百分率低于IRI組(P(0.05)。 7．在熱缺血和冷缺血模型中，IPO組和IRI組的肝臟細(xì)胞凋亡率都明顯高于Sham組(P(0.01)，并且IPO組的AI低于IRI組(P0.05)。 結(jié)

7、論: 1．缺血后處理對(duì)肝臟的冷/熱缺血再灌注損傷及細(xì)胞凋亡具有一定的保護(hù)作用。 2．缺血后處理通過抑制中性粒細(xì)胞的聚集；減少SOD失活，從而清除氧自由基；減少炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的釋放來發(fā)揮其對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。 3．缺血后處理通過減少炎性細(xì)胞因子的釋放，清除氧自由基，抑制促凋亡基因Fas的表達(dá)來減輕肝臟冷/熱缺血再灌注后的細(xì)胞凋亡。第二部分 IPO、IPC、IPC-IPO對(duì)肝臟缺血再灌

8、注損傷和細(xì)胞凋亡保護(hù)作用的對(duì)比研究研究目的對(duì)比研究缺血后處理(IP0)與缺血預(yù)處理(IPC)對(duì)肝臟缺血再灌注損傷和細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用；并分析缺血后處理與缺血預(yù)處理聯(lián)合應(yīng)用(IPC-IPO)是否能更為有效的減輕肝臟冷/熱缺血再灌注損傷。 參照Nauta等所描述的方法建立大鼠部分肝臟30分鐘熱缺血模型，并根據(jù)Kamada等所描述的方法進(jìn)行大鼠肝移植手術(shù)來建立肝臟2小時(shí)冷缺血模型。熱缺血和冷缺血模型各分為4組： IRI組：?jiǎn)渭?/p>

9、30分鐘熱缺血或2小時(shí)冷缺血后再灌注，無(wú)其它干預(yù)； IPC組：在冷/熱缺血開始前，給予1個(gè)循環(huán)的"5分鐘缺血-5分鐘再灌注"的缺血預(yù)處理； IPO組：結(jié)束冷/熱缺血后，在開始長(zhǎng)時(shí)間灌注的起始階段，給予3個(gè)循環(huán)的"30秒灌注-30秒再缺血"缺血后處理； IPC-IPO組：在冷/熱缺血開始前，給予1個(gè)循環(huán)的"5分鐘缺血-5分鐘再灌注"缺血預(yù)處理，并且在結(jié)束冷/熱缺血后，在開始長(zhǎng)時(shí)間灌注的起始階段，給予3個(gè)循環(huán)的"30

10、秒灌注-30秒再缺血"缺血后處理。 各組一半動(dòng)物在再灌注后3小時(shí)后，采集樣本檢測(cè)血清AST、ALT水平，膽汁葡萄糖含量、GGT水平，肝臟組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)含量；采用化學(xué)比色法測(cè)定肝組織中丙二醛(MDA)含量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性：采用免疫組化檢測(cè)檢測(cè)肝細(xì)胞Fas基因的表達(dá)；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)