體內外研究18β-甘草次酸對MDSC免疫抑制功能的影響.pdf

1、目的：肝細胞癌(Hepatocellular.carcinoma，HCC)是臨床過程中多見的惡性腫瘤，它的惡性程度高，難以控制，診療過程中不易被發(fā)現(xiàn)，病情進展快速，對人們的健康影響嚴重。近年來，中國肝癌的預防和治療有了長足的發(fā)展，其中肝癌的免疫診療及預防的研究也不斷深入。最近研究結果發(fā)現(xiàn)，在腫瘤模型小鼠的血液、脾臟和腫瘤中，都存在大量的髓系來源的抑制細胞(myeloid-derivedsuppressorcel1，MDSC)，而且在臨床

2、腫瘤患者中，對其血液和腫瘤組織進行檢測，結果發(fā)現(xiàn)大量的MDSC。MDSC的大量積累，抑制了機體免疫功能，促進腫瘤細胞逃脫免疫細胞的攻擊，進而使腫瘤發(fā)生侵襲和轉移。本文通過體內外實驗，研究18β-甘草次酸(GA)對肝癌微環(huán)境中MDSC增殖抑制的作用及其機理。為GA抗肝癌作用新靶點的闡明提供了新的思路，同時也為后續(xù)開展MDSC免疫學及細胞機制的研究提供實驗數(shù)據(jù)和理論支持。
　　實驗方法：鼠源性肝癌細胞H22，用注射器將其打入BALB/

3、c雄性小鼠肝臟內，建立小鼠原位模型，手術10天后斷頸處死小鼠。在細胞實驗中，通過流式分選技術分選模型小鼠脾臟中MDSC細胞，GA處理MDSC24小時后，流式檢測MDSC精氨酸代謝酶1（Arg-1）、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)及活性氧(ROS)的表達，通過共培養(yǎng)實驗，流式細胞術檢測MDSC對T細胞抑制的影響及作用機制。在動物實驗中，將動物隨機分為三個組別:正常組、模型組、GA組。收集三組小鼠的脾臟、肝臟及腫瘤，通過流式細胞技術檢測各組

4、小鼠脾臟和腫瘤中各免疫細胞的表達情況。
　　結果：構建小鼠原位肝癌模型并從脾臟中成功分選出MDSC;在細胞實驗中，GA均能下調MDSC中Arg-1、iNOS和ROS的表達;MDSC能抑制T細胞的增殖，經(jīng)GA處理MDSC后，其能明顯抑制T細胞增殖。在動物實驗中，雖然GA組較模型組脾臟和腫瘤中MDSC及其亞型的表達均明顯上調，但MDSC功能中Arg-1、iNOS和ROS的表達是下調的。同時GA組中NK細胞的表達較模型組明顯升高。