雞MHC B-F區(qū)基因SNPs分子標記與免疫性狀關(guān)系的研究.pdf

1、雞主要組織相容性復(fù)合體(maior histocompatibility complex，MHC)是由緊密連鎖、高度多態(tài)的基因座所組成的位于16號染色體上的一個遺傳區(qū)域，與多種疾病的抗性或易感性相關(guān)。本研究以飼養(yǎng)在相同條件下的中國地方雞種北京油雞和引進品種來航蛋雞各250只母雞為試驗動物，比較了兩品種主要免疫功能性狀之間的差異，利用PCR-SSCP分型技術(shù)對兩雞科MHC-B．F區(qū)Exon2基因進行多態(tài)性分析和比較，通過關(guān)聯(lián)分析，篩選出與

2、不同免疫性狀顯著相關(guān)的SNPs位點，研究結(jié)果如下： 1、北京油雞和來航蛋雞的免疫性狀比較： ①北京油雞的異嗜性粒細胞與淋巴細胞比率(Heterophil/L ymphocyte,H/L)為0.36±0.21，來航蛋雞為0.52±0.51，二者呈顯著性差異(P<0.001)；北京油雞的白細胞總數(shù)(blood white cell count，BWCC)明顯高于來航蛋雞(P<0.001)；②綿羊紅細胞(sheep blood

3、 red．cell，SRBC)抗體滴度在兩品種之間差異不顯著(P>0.05)；③4次測定禽流感(Avian Influenza，AI)(H5N1毒株)免疫抗體滴度，北京油雞都均高于來航蛋雞，差異均達到極顯著水平(P<0.001)。④同期測定新城疫疫苗(NewcastleDisease，ND)(La Sota毒株)抗體滴度，北京油雞的4個測定日齡的ND滴度均高于來航蛋雞(P<0.001)。該研究結(jié)果初步顯示，北京油雞和引進來航蛋雞品種的免

4、疫功能性狀具有明顯的遺傳差異，北京油雞的綜合免疫性能和抗應(yīng)激能力優(yōu)于來2、北京油雞和來航蛋雞的B-F區(qū)外顯子2遺傳多態(tài)性比較： B-F區(qū)基因外顯子2共264bp。在67個北京油雞外顯子2的堿基的序列中發(fā)現(xiàn)了50個核苷酸變異位點，其中有31個引起了氨基酸的變異；在134個來航蛋雞發(fā)現(xiàn)了42個核苷酸變異位點，其中有25個引起了氨基酸的改變，兩個品種均表現(xiàn)出核酸同源性(213/264，223/264)高于氨基酸序列(57/88,63/

5、88)的同源性，表明其序列多態(tài)性更多地表現(xiàn)在氨基酸水平上。通過對兩品種序列中突變位點的比較，發(fā)現(xiàn)36個SNP位點在兩品種中均出現(xiàn)，14個核苷酸突變?yōu)楸本┯碗u所特有，其中12個為有義突變；來航蛋雞特有的SNP位點僅為6個，其中只有2個為有義突變。該結(jié)果表明了北京油雞無論是在DNA分子水平還是氨基酸水平上，其多態(tài)性均高于來航蛋雞。 3、MHC B-F區(qū)基因的SNPs與免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析： 對134只來航蛋雞進行MhC B-F

6、區(qū)基因外顯子2 SNPs位點與免疫性狀進行關(guān)聯(lián)分析，共發(fā)現(xiàn)的有義突變中有11個SNPs位點與所檢測的部分免疫性狀存在不同程度的顯著相關(guān)性，其結(jié)果為： 64位點的SNP與H/l顯著相關(guān)(P<0.05)；182位點與SRBC相關(guān)(P P<0.05)；69、218、220、221、223、235共六個位點均發(fā)現(xiàn)與ND抗體滴度水平顯著相關(guān)(P<0.05)：214、217、232位點與AI抗體滴度顯著相關(guān)(P<0.05)。 同時，對67只

7、北京油雞進行MHC B-F區(qū)基因外顯子2的SNP位點與免疫性狀進行關(guān)聯(lián)分析，共發(fā)現(xiàn)的有義突變中有5個SNPs位點與所檢測的部分免疫性狀存在不同程度的顯著相關(guān)性：158、221、194和192位點的SNPs均發(fā)現(xiàn)與ND免疫抗體滴度值存在不同程度的相關(guān)性(P<0.01，P<0.05)；214位點的SNP發(fā)現(xiàn)與AI抗體滴度水平呈現(xiàn)顯著相關(guān)(P<0.05)。 兩個品種中共同存在214位點的SNP，均發(fā)現(xiàn)與禽流感免疫抗體滴度顯著相關(guān)(P<