Ⅰ妊娠期糖尿病患者羊水量變化與其胎膜和胎盤組織中AQP8、AQP9表達關(guān)系的研究Ⅱ吲哚美辛對人羊膜上皮細胞AQP8表達的影響.pdf

1、第一部分：
　　 目的:研究妊娠期糖尿病孕婦羊水量變化與其胎膜和胎盤組織中AQP8、AQP9表達之間的關(guān)系,探討AQP8、AQP9在妊娠期糖尿病異常羊水量中的調(diào)節(jié)作用,為妊娠期糖尿病患者羊水量異常的治療提供新的思路。
　　 方法:選取2008年10月-2009年8月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院和重慶市婦幼保健院行足月剖宮產(chǎn)分娩(37-42周)的妊娠期糖尿病(GDM)羊水過多、羊水量正?；颊吒?0例為研究對象,以同期足月?lián)衿?/p>

2、剖宮產(chǎn)的正常孕婦20例為對照組。剖宮產(chǎn)術(shù)后取胎膜和胎盤組織。采用逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測AQP8、AQP9 mRNA在各組胎膜和胎盤組織中的表達；采用免疫印跡(Western blotting)技術(shù)檢測AQP8、AQP9蛋白在各組胎膜和胎盤中的表達水平。
　　 結(jié)果:(1)GDM羊水量過多組羊膜、絨毛膜及胎盤組織中AQP8mRNA的表達水平分別為0.72±0.085、0.62±0.131、1.18±0.090

3、,AQP9mRNA水平分別為0.79±0.106、0.60±0.132、0.87±0.087；GDM羊水量正常組羊膜、絨毛膜及胎盤組織中AQP8 mRNA表達水平分別為0.50±0.068、0.61±0.120、0.84±0.074,AQP9 mRNA表達水平分別為0.51±0.072、0.58±0.058、0.63±0.062；對照組三種組織中AQP8 mRNA表達水平分別為0.47±0.041、0.56±0.085、0.82±0.0

4、96,AQP9 mRNA表達水平分別為0.49±0.094、0.55±0.096、0.61±0.044。羊膜和胎盤組織中,GDM羊水量過多組AQP8、AQP9 mRNA表達水平與GDM羊水量正常組及對照組分別比較,差異均有顯著性(P<0.05),GDM羊水量正常組AQP8、AQP9 mRNA水平與對照組分別比較,差異無顯著性(P>0.05)；而絨毛膜組織中,三組AQP8、AQP9 mRNA表達水平組間比較差異無顯著性(P>0.05)。(

5、2)GDM羊水量過多組羊膜、絨毛膜及胎盤組織中AQP8蛋白的表達水平分別為0.54±0.044、0.47±0.112、0.90±0.098,AQP9蛋白水平分別為0.59±0.042、0.48±0.121、0.79±0.051；GDM羊水量正常組羊膜、絨毛膜及胎盤組織中AQP8蛋白表達水平分別為0.34±0.031、0.46±0.075、0.51±0.058,AQP9蛋白表達水平分別為0.30±0.061、0.44±0.096、0.48

6、±0.039,對照組三種組織中AQP8蛋白表達水平分別為0.32±0.052、0.43±0.058、0.49±0.039,AQP9蛋白表達水平分別為0.28±0.031、0.42+0.102、0.47±0.047。羊膜和胎盤組織中,GDM羊水量過多組AQP8、AQP9蛋白表達水平與GDM羊水量正常組及對照組分別比較,差異均有顯著性(P<0.05),GDM羊水量正常組AQP8、AQP9蛋白水平與對照組分別比較,差異無顯著性(P>0.05)

7、；在絨毛膜組織中,三組AQP8、AQP9蛋白水平組間比較,差異無顯著性(P>0.05)。
　　 結(jié)論:妊娠期糖尿病患者合并羊水量過多時,其羊膜和胎盤組織中AQP8、AQP9的mRNA和蛋白表達均上調(diào)；AQP8、AQP9可能在妊娠期糖尿病羊水量異常的調(diào)節(jié)機制中發(fā)揮重要作用。
　　 第二部分：
　　 目的:本研究探討吲哚美辛對人羊膜上皮細胞.AQP8表達的影響,為其治療羊水過多提供實驗室依據(jù),并為開發(fā)藥物治療羊水過多

8、提供新的靶點。
　　 方法:通過酶消化法對羊膜上皮細胞進行原代培養(yǎng),應(yīng)用免疫細胞化學(xué)方法對人羊膜上皮細胞進行細胞鑒定。實驗分為藥物處理組和對照組。藥物處理組加入不同濃度的吲哚美辛(10,20,50,100,200μM/L)孵育24小時,另以100μM/L吲哚美辛分別孵育羊膜上皮細胞6,12,24,36,48h。采用RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測經(jīng)吲哚美辛作用后羊膜上皮細胞AQP8 mRNA及蛋白表達的變化

9、。
　　 結(jié)果:(1)不同濃度的吲哚美辛對羊膜上皮細胞AQP8 mRNA及蛋白表達具有下調(diào)作用,其200μM/L處理組的AQP8 mRNA及蛋白表達水平達峰值,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。(2)100μM/L人羊膜上皮細胞6,12,24,36,48h,各相應(yīng)時間點藥物處理組與對照組比較,從12h開始AQP8 mRNA和蛋白表達水平低于對照組(P<0.01)。且隨著處理時間的延長,AQP8 mRNA和蛋白表達水平