高脂、炎癥狀態(tài)下Api6在巨噬細胞中的表達研究.pdf

1、目的：凋亡抑制因子6(Apoptosis Inhibitor6,Api6)也叫作AIM或Spot,是清道夫受體富含半胱氨酸殘基家族新成員,在免疫反應、腫瘤發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用；但作為清道夫受體,Api6在脂質代謝中的作用尚未得到深入研究。本研究選用人THP-1單核/巨噬細胞和小鼠RAW264.7巨噬細胞探討①高脂、炎癥狀態(tài)下,兩種巨噬細胞脂質蓄積情況；②高脂和/或炎癥狀態(tài)下,清道夫受體SR-A、CD36和Api6在兩種巨噬細胞中的表達

2、；③高脂和/或炎癥狀態(tài)下,核受體LXRalpha.LXRbeta表達與Api6表達的相關關系。
　　 方法：⑴從人新鮮血漿中提取LDL,氧化制備成oxLDL；采用oxLDL刺激細胞建立高脂模型,采用脂多糖(LPS)刺激細胞建立炎癥模型,油紅O染色觀察巨噬細胞脂質蓄積情況。⑵提取Balb/c小鼠腹腔巨噬細胞mRNA,逆轉錄擴增獲得Api6cDNA全長,構建入pCDNA3.1質粒中,獲得可以表達.Api6基因的質粒pCDNA3.1/

3、Api6。⑶實時熒光定量PCR技術(real-time quantitative PCR)檢測Api6、CD36、SR-A、LXRalpha、LXRbeta、ABCA1、ABCG1等基因在各種處理條件下,兩種巨噬細胞中mRNA的表達水平。
　　 結果：①研究發(fā)現(xiàn)200 ng/ml的LPS和100μg/ml的oxLDL處理可以導致體外培養(yǎng)的兩種巨噬細胞出現(xiàn)異常的脂質蓄積。②成功構建了pCDNA3.1/Api6質粒,并對RAW264

4、.7巨噬細胞進行瞬時轉染,使Api6表達上調了12500倍。③高脂情況下,清道夫受體SRA在RAW264.7細胞和THP-1細胞中的表達分別上調了6倍、2.5倍和6倍、44倍。但同樣處理條件下,Api6在RAW264.7細胞的表達沒有明顯上調；而炎癥和高脂同時存在時,Api6在THP-1細胞中的表達卻上調了2.7倍。④LXR受體激動劑T0901317可以使RAW264.7細胞中LXR的靶基因ABCA1和ABCG1基因表達分別上調22倍和

5、7倍；THP-1巨噬細胞中ABCA1和ABCG1基因表達均上調9倍；但LXR受體激動劑T0901317沒有改變Api6在RAW264.7細胞中的表達,Api6在THP-1細胞中的表達則上調了2倍。Api6在各種處理條件下表達水平的變化趨勢與L,XRa的表達水平相關。
　　 結論：200ng/ml的LPS和100μg/ml的oxLDL處理可以導致體外培養(yǎng)的RAW264.7和THP-1細胞出現(xiàn)異常的脂質蓄積。炎癥、高脂狀態(tài)下,Api