脂肪酸誘導(dǎo)鵝肝細(xì)胞差異表達(dá)基因的篩選和鑒定.pdf

1、在動(dòng)物肝細(xì)胞內(nèi)，甘油三酯(TG)的異常沉積導(dǎo)致肝脂肪變性。將游離脂肪酸(FFAs)添加到肝細(xì)胞中可導(dǎo)致肝脂肪變性，但是關(guān)于FFAs與TG的異常沉積之間聯(lián)系和脂肪沉積相關(guān)基因的差異表達(dá)的機(jī)制目前還不清楚。本研究以四川白鵝(Ansercygnoides)為研究對象，利用抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建了FFAs誘導(dǎo)的肝脂肪變性細(xì)胞和正常肝細(xì)胞差異cDNA文庫，對文庫中序列進(jìn)行了功能注釋和分類，初步揭示了FFAs誘導(dǎo)后肝細(xì)胞差異表達(dá)基因的種類和數(shù)量，這為

2、從分子水平探討肥肝的機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。本研究取得的主要結(jié)果如下： 1.采用添加1mM游離脂肪酸混合物FFAs到鵝原代肝細(xì)胞中培養(yǎng)36h，成功建立肝細(xì)胞脂肪變性的細(xì)胞模型。 2.應(yīng)用抑制性消減雜交技術(shù)成功構(gòu)建了正常肝細(xì)胞與脂肪變性肝細(xì)胞正反向SSH文庫。正向文庫(SSH-1)擴(kuò)增后獲得1344個(gè)克隆，反向文庫(SSH-2)擴(kuò)增后獲得1152個(gè)克隆。應(yīng)用斑點(diǎn)雜交篩選陽性克隆測序，SSH-1文庫有30個(gè)測序成功，SSH-2文庫有

3、23個(gè)測序成功。 3.對去除載體序列和接頭序列后的EST通過BLASTn進(jìn)行在線DNA序列同源性比較分析得到：SSH-1獲得23個(gè)已知基因，占克隆測序的76.7％；已知EST有6個(gè)占20％；全新EST有1個(gè)占3.3％。其中SSH-2文庫已知基因有18個(gè)占克隆測序的78.3％；已知EST有1個(gè)占4.3％，全新EST有4個(gè)占17.4％。 4.SSH文庫共獲得已知基因41個(gè)，對EST功能分類發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)和運(yùn)動(dòng)占已知基因的2％