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文檔簡介
1、microRNA(miRNA)是一類重要的非編碼小RNA,在靶基因轉錄后水平調控基因的表達,具有明顯的階段性和組織特異性,在動物各個發(fā)育階段的生長發(fā)育和繁殖過程中起作用。香豬作為貴州地方豬品種的優(yōu)秀代表,性成熟早,產仔數少,目前香豬的繁殖調控機理不完全清楚。本文采用組織學切片技術研究不同月齡香豬睪丸的顯微結構,構建四個月齡香豬睪丸組織小RNA cDNA文庫,通過HiSeq高通量測序技術,結合生物信息學分析,鑒定出香豬不同發(fā)育期miRNA
2、的表達譜,分析差異表達的miRNA分子類型和結構,推測miRNA作用的靶基因和功能,選擇6個差異表達的miRNA,研究在不同發(fā)育時期睪丸以及其它組織的表達量變化,獲得的主要結果如下:
1、香豬睪丸的發(fā)育特點是4月齡時可檢測到成熟精子。
2、利用HiSeq高通量測序技術,獲得香豬2月齡、3月齡、7月齡和18月齡microRNA表達譜,每個表達譜的高質量microRNA序列接近600萬條。
3、從2月齡香豬睪丸
3、RNA文庫中鑒定出254個已知miRNA和180個候選miRNA;3月齡文庫鑒定出251個已知miRNA和176個候選miRNA;7月齡文庫鑒定了227個已知miRNA和120個候選miRNA;18月齡文庫鑒定215個已知miRNA和100個候選miRNA。隨機選擇6個miRNA分子采用實時熒光定量PCR方法證實在相應月齡的睪丸組織中都有表達。
4、找到1165種miRNA在四個時期睪丸文庫中的表達量有顯著差異,其中2月齡文庫
4、中有74個miRNA的表達量顯著低于3月齡文庫;2月齡文庫miRNA的表達量顯著高于7月齡文庫和18月齡文庫,分別有219個和224個miRNAs的表達量上調。3月齡文庫miRNA的表達量顯著高于7月齡文庫和18月齡文庫,分別有268個和272個miRNAs的表達量上調。7月齡文庫miRNA的表達量顯著高于18月齡文庫,有21個miRNAs的表達量上調。2月齡香豬睪丸中的miRNA表達量最高,18月齡中的表達量最低。
5、使用
5、mirecord軟件對10種差異表達的miRNA的靶基因進行預測,共得到1953個靶基因,經KEGG Pathway分析,這些靶基因可能參與香豬睪丸的發(fā)育和精子的發(fā)生過程。
6、經實時定量RT-PCR檢測,6個miRNAs在不同發(fā)育時期的睪丸組織中均表達,總體趨勢是,隨著香豬睪丸從1月齡增加到7月齡,Let-7a-5p和miR-10的表達量先升高后下降;miR-202表達量的逐漸降低;miR-200b表達量先下降后上升;miR
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