豬和牛CNR的分子克隆及其配體對(duì)cAMP信號(hào)通路的影響.pdf

1、豬和牛CNR的分子克隆及其配體對(duì)cAMP信號(hào)通路的影響PigandcattlecannabinoidreceptorsgenecloningandtheeffectoftheirligandsoncAMPsignalingpathway研究生：孫艷君專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師：王志強(qiáng)副教授張湯杰教授揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2014年6月II一揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文染至HEK293T細(xì)胞，用蛋白免疫印跡(Westernblot)檢測pCNRl，cCNRl

2、和cCNR2的表達(dá)情況，結(jié)果成功表達(dá)目的蛋白。以脂質(zhì)體法分別將熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒pGL4與真核表達(dá)載體pcDNA31()myc／pCNRl，pcDNA31()myc／cCNRl和pcDNA31()myc／cCNR2共轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞，24h后加入不同濃度的激動(dòng)劑和反向激動(dòng)劑(2AG和PEA為激動(dòng)劑，AM281和AM630為反向激動(dòng)劑)，結(jié)果得到，2AG和PEA單獨(dú)作用時(shí)可分別抑制表達(dá)pCNRl，cCNRl和cCNR2的細(xì)胞內(nèi)c

3、AMP信號(hào)通路，而同時(shí)加入一定濃度的Forskolin卻可得到相反的結(jié)果，表達(dá)pCNRl和cCNRl的細(xì)胞內(nèi)cAMP水平會(huì)隨著2AG濃度的增加而增加，但Forskolin和PEA共同作用于表達(dá)cCNR2的細(xì)胞卻未得到同樣的結(jié)果，另外，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)2AG濃度達(dá)到10。5M時(shí)，會(huì)使表達(dá)pCNRl和cCNRl的細(xì)胞內(nèi)cAMP水平忽然升高；而AM281和AM630無論是單獨(dú)作用還是與Forskolin共同作用，結(jié)果都是在一定濃度范圍內(nèi)隨著AM