FAK信號(hào)通路調(diào)控豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的分子機(jī)制.pdf

1、為研究不同品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附差異的分子機(jī)制，本試驗(yàn)以華南地方品種藍(lán)塘豬和外來品種長白豬背最長肌的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為試驗(yàn)材料，利用細(xì)胞劃痕試驗(yàn)和transwell小室遷移試驗(yàn)，比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移能力；細(xì)胞外基質(zhì)（Fn）-細(xì)胞粘附試驗(yàn)，比較兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的粘附能力；運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)，檢測(cè)兩品種豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞粘著斑和F-肌動(dòng)蛋白的表達(dá)；采用Western blot技術(shù)，檢測(cè)兩種衛(wèi)星細(xì)胞遷移24 h和粘附2

2、 h時(shí)間點(diǎn)FAK/paxillin信號(hào)通路的蛋白表達(dá)情況，結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)兩種衛(wèi)星細(xì)胞粘附2 h時(shí)整合素（ITGB）關(guān)鍵基因的表達(dá)；同時(shí)以藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為材料，選用 p-FAK特異性抑制劑PF-573228，分別以0、5和10μmol/L濃度處理藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞24 h，檢測(cè)其對(duì)衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的影響，以及粘著斑、F-肌動(dòng)蛋白和FAK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。
　　試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　（1）細(xì)胞劃

3、痕試驗(yàn)和transwell小室遷移試驗(yàn)表明，藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移能力顯著強(qiáng)于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞；細(xì)胞外基質(zhì)-細(xì)胞粘附試驗(yàn)表明，藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的粘附能力顯著強(qiáng)于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞。
　　（2）細(xì)胞免疫熒光結(jié)果表明，相比于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的粘著斑表達(dá)更豐富，而F-肌動(dòng)蛋白的表達(dá)量更低。
　?。?）藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在遷移24 h的p-FAK（Tyr397）和p-paxillin（Tyr

4、118）蛋白表達(dá)顯著高于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞；藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在粘附2 h的p-FAK（Tyr397），p-paxillin（Tyr118）和p-Akt（Ser473）蛋白表達(dá)顯著高于長白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，粘附基因ITGB3存在差異的趨勢(shì)。
　?。?）以10μmol/LPF573228濃度處理藍(lán)塘豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞24 h，能顯著抑制p-FAK（Tyr397）的蛋白表達(dá)；且5和10μmol/L PF-573228處理能顯著抑制骨

5、骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移能力，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在10μmol/L PF-573228處理濃度下，細(xì)胞粘附能力受到抑制。
　?。?）與對(duì)照組相比，PF-573228以5和10μmol/L濃度處理衛(wèi)星細(xì)胞能降低粘著斑的數(shù)量，抑制p-paxillin（Tyr118）和p-Akt（Ser473）的蛋白表達(dá)，不影響F-肌動(dòng)蛋白的變化。
　　以上結(jié)果說明：藍(lán)塘豬和長白豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移和粘附的差異與粘著斑和 F-肌動(dòng)蛋白的形成密切相關(guān)，F(xiàn)AK