異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:通過對(duì)WHOⅡ-Ⅲ級(jí)膠質(zhì)瘤組織中異檸檬酸脫氫酶同工酶1(Isocitrate Dehydrogenase IDH1)的正常酶活性及酶蛋白含量的測(cè)定來探討膠質(zhì)瘤中IDH1基因突變表達(dá)的作用機(jī)制。
　　方法:56例人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本取自于2012年7月至2013年12月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)標(biāo)本，病理診斷由醫(yī)院病理科按WHO腦腫瘤分類分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（2007年）進(jìn)行，其中星形細(xì)胞瘤(Ⅱ級(jí))10例，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤(Ⅱ級(jí))12例

2、，少突星形細(xì)胞瘤(Ⅱ級(jí))5例，間變型星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤(Ⅲ級(jí))15例，間變形少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤(Ⅲ級(jí))14例。另外取腦外傷開顱術(shù)中正常腦組織（額葉及顳葉）5例作為對(duì)照。所有腫瘤標(biāo)本及正常腦組織標(biāo)本均快速入液氮中-80℃凍存。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immuno sorbent assay ELISA)方法中的雙抗體夾心法檢測(cè)所有標(biāo)本組織IDH1正常酶活性。將以上標(biāo)本為3組:正常腦組織組、Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤組和Ⅲ級(jí)膠質(zhì)瘤組。采

3、用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)同時(shí)測(cè)定3組標(biāo)本IDH1酶蛋白含量，得出相應(yīng)標(biāo)本代表蛋白含量的灰度值，采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1酶活性
　　采用ELISA法對(duì)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行酶活性值檢測(cè)。以正常腦組織組酶活性值范圍為標(biāo)準(zhǔn)，將所有腫瘤組織酶活性值分為低活性組和高活性組，數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，結(jié)果顯示:正常腦組織組（n=5）為80.297±3.357;低活性組（n=35）為48.755±

4、6.837;高活性組（n=21）為132.246±14.887。將以上三組兩兩比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。低活性組腫瘤例數(shù)為35，約占總腫瘤例數(shù)的62.5％。
　　2酶含量
　　采用Western Blot法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行酶蛋白含量測(cè)定。數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，正常腦組織組（n=5）:0.2609±0.0653，Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤（n=27）:0.4577±0.8321，Ⅲ級(jí)膠質(zhì)瘤（n=29）:0.7110±0.0774。以

5、上三組兩兩比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3酶活性與酶蛋白含量相關(guān)性分析
　　采用Pearson計(jì)算相關(guān)分析，Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤相關(guān)系數(shù)0.009;Ⅲ級(jí)膠質(zhì)瘤相關(guān)系數(shù)0.201;所有Ⅱ、Ⅲ級(jí)腫瘤相關(guān)系數(shù)0.071，酶活性大小與酶含量多少相關(guān)性不明顯。
　　結(jié)論:
　　1與正常對(duì)照組相比，腦膠質(zhì)瘤組中IDH1正常酶活性存在明顯差異，活性低于正常的占62.5％，高于正常的占37.5％。結(jié)果與目前相關(guān)亞型膠質(zhì)瘤研

6、究IDH1基因突變率相當(dāng)，存在IDH1正常酶活性降低的膠質(zhì)瘤中可認(rèn)為含有IDH1基因突變。
　　2與正常對(duì)照組相比，膠質(zhì)瘤組織中IDH1酶蛋白含量明顯增高，且所測(cè)膠質(zhì)瘤中，Ⅱ級(jí)腫瘤IDH1酶蛋白含量較Ⅲ級(jí)腫瘤更高。酶蛋白表達(dá)與腫瘤級(jí)別相關(guān)，提示腫瘤的惡性水平在一定程度上影響著IDH1酶蛋白的含量。
　　3膠質(zhì)瘤組織中，無論IDH1正常酶活性的高低與酶蛋白含量多少并無明顯相關(guān)聯(lián)系，提示雖然IDH1變異基因表達(dá)降低了IDH1正常