絹絲昆蟲柳蠶異檸檬酸脫氫酶基因的克隆及序列分析.pdf

1、異檸檬酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase，IDH）是生物中一種重要的有脫羧作用的氧化還原酶，在生物中有NAD-依賴型的異檸檬酸脫氫酶和NADP-依賴型的異檸檬酸脫氫酶兩種形式。異檸檬酸脫氫酶不僅在氨基酸和維生素合成、能量代謝中扮演重要角色，而且在三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路的碳通量分配中起關(guān)鍵性調(diào)控作用，因此異檸檬酸脫氫酶是國(guó)際上公認(rèn)的研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能、酶的催化與調(diào)節(jié)機(jī)制、代謝途徑最好模型之一。
　　 近期

2、對(duì)IDH的研究很多，包括：NADP-IDH的生物學(xué)特性中的底物及輔酶專一性，金屬離子的影響，最適pH、最適溫度及熱穩(wěn)定性，化學(xué)修飾劑等以及NADP-IDH的空間結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，NADP-IDH的調(diào)節(jié)、催化等作用機(jī)制。這些研究為我們更清楚的認(rèn)識(shí)其在生物體代謝和功能等方面的作用提供了較好的理論依據(jù)。
　　 到目前為止，人，小鼠，斑馬魚，果蠅，惡性瘧原蟲，家蠶，大豆等的NADP-異檸檬酸脫氫酶序列已進(jìn)行了解析，它們的異檸檬酸脫氫酶具有一定的

3、同源性，為了弄清柳蠶異檸檬酸脫氫酶序列的特性及其與其它物種的關(guān)系，從而能夠更加系統(tǒng)的研究異檸檬酸脫氫酶的特點(diǎn)，更好地開發(fā)利用柳蠶資源，根據(jù)已報(bào)道的NADP-異檸檬酸脫氫酶基因的保守性序列設(shè)計(jì)引物，從柳蠶蛹脂肪體中提取RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA為模板進(jìn)行基因克隆、測(cè)序。獲得的柳蠶NADP依賴性異檸檬酸脫氫酶序列全長(zhǎng)1317bp，編碼439個(gè)氨基酸，含有異檸檬酸脫氫酶保守性結(jié)構(gòu)，與家蠶異檸檬酸脫氫酶的氨基酸序列同源性達(dá)95％，這也從另一方面