浙江省仔豬黃白痢大腸桿菌耐藥表型及基因型分析.pdf

1、仔豬黃白痢(Piglet'syellow-white dysentery)是由某些產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)引起的初生仔豬腸道傳染病,是養(yǎng)豬生產(chǎn)上的常見病和多發(fā)病。臨床應(yīng)用抗菌藥物雖對仔豬黃白痢的防治起到了積極作用,但隨著抗菌藥物的大量和不合理應(yīng)用,仔豬黃白痢大腸桿菌耐藥性問題越來越突出,己成為嚴重影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的一個難題。
　　 本文用直腸棉拭子采集浙江省多個規(guī)模化豬場黃白痢仔豬的病料,經(jīng)細菌分離純化、生化試驗和小鼠致病性試驗

2、等,鑒定得到47株病原性大腸桿菌。通過WHO推薦的K-B法測定其對16種抗菌藥物的耐藥性。結(jié)果表明,在16種抗菌藥物中,細菌對慶大霉素、氨芐青霉素、羧芐青霉素、紅霉素、強力霉素現(xiàn)出很高的耐藥性,耐藥率分別為91.4％、93.6％、95.7％、97.8％、100％。進一步的耐藥譜分析表明,47株大腸桿菌分離株均對5種及5種以上抗菌藥物耐藥:5～8種抗菌藥物耐藥的有6株,對9～11種抗菌藥物耐藥的有27株,對12～14種抗菌藥物耐藥的有14

3、株。對10種抗菌藥物耐藥的菌株所占比例最大,為25.5％,其次是對11種抗菌藥物耐藥的菌株有8株,占17.0％。沒有對15種及15種以上抗菌藥物耐藥的菌株。
　　 采用瓊脂二倍稀釋法使平板上接種細菌量分別為1.5×104 CFU、1.2×1010 CFU,測定環(huán)丙沙星、麻保沙星、多粘菌素B、壯觀霉素對上述大腸桿菌分離株的最低抑菌濃度MIC、防耐藥突變濃度MPC,并計算耐藥選擇指數(shù)SI(MPC/MIC)。試驗結(jié)果表明,受試菌對多粘

4、菌素B、壯觀霉素、麻保沙星、環(huán)丙沙星的敏感率分別為80.85％、68.08％、17.02％、12.76％,兩種喹諾酮類藥物已有交叉耐藥產(chǎn)生;兩種喹諾酮類藥物對敏感菌的MPC為1～16μg/mL,SI為4～32,多粘菌素B的MPC為4～16μg/mL,SI為2～8,壯觀霉素的MPC為32～128μg/mL,SI為2～32,因此認為多粘菌素B不僅抗菌活性較高,其SI也低于環(huán)丙沙星、麻保沙星,即多粘菌素B的防耐藥突變能力強于麻保沙星與環(huán)丙沙星

5、,壯觀霉素雖然抗菌效果明顯但是防突變能力與環(huán)丙沙星、麻保沙星類似。
　　 Touch-down PCR擴增47株大腸桿菌分離株中磺胺類耐藥基因(sulⅠ基因、sulⅡ基因、sulⅢ基因)、氯霉素類耐藥基因(cat2基因、Cml A基因、Cml B基因、Flor基因)、四環(huán)素類耐藥基因(tetA基因、tetB基因、tetC基因、tetD基因、tetE基因、tetG基因),結(jié)果表明,47個大腸桿菌分離株中耐藥基因sulⅠ、sulⅡ、

6、sulⅢ、tetA、tetB、CmlA較為普遍,陽性率分別為55.3％、74.5％、72.3％、70.2％、47.6％、51.1％,耐藥基因tetD、tetE的陽性率分別為14.9％、19.1％。未能檢測到耐藥基因tetC、tetG、cat2、Cml B、Flor。磺胺類耐藥基因、四環(huán)素類耐藥基因、氯霉素類耐藥基因的陽性率分別為100％、100％、51.1％,與藥敏試驗的檢測結(jié)果有較高的一致性,符合率分別為100％、88.4％、79.4

7、％。
　　 對Ⅰ型、Ⅱ型整合酶基因通過PCR體外擴增并經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析,結(jié)果表明47株大腸桿菌分離株中39株檢測到Ⅰ型整合酶基因,5株檢測到Ⅱ型整合酶基因,分別占檢測菌株的82.98％和10.64％,Ⅰ型整合酶陽性菌株多重耐藥率(8重及以上)高于陰性菌株,所有檢測到Ⅱ型整合酶基因的菌株也同時檢測到了Ⅰ型整合酶基因,符合率100％,說明同一株細菌可同時攜帶多個整合子。
　　 經(jīng)PCR體外擴增、瓊脂糖凝膠電泳分析,47株

8、大腸桿菌分離株中,有15株檢測到Ⅰ型整合子基因盒,陽性率為31.91％,基因盒大小共4種,通過凝膠電泳圖譜回歸方程計算,大小分別為544bp、1075bp、1618、2302bp。15株陽性菌中含544bp的有1株,含1075bp的有1株,含1618 bp的有9株,含2302bp的有4株。Ⅰ型整合子陽性菌易表現(xiàn)出對強力霉素、氨芐青霉素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、羧芐青霉素的耐藥性,耐藥率分別為100％(15/15)、93.3％(14/15)、

9、93.3％(14/15)、93.3％(14/15)、100％(15/15)。
　　 本研究表明,浙江省仔豬黃白痢大腸桿菌的耐藥性已經(jīng)相當嚴重,且Ⅰ型整合子攜帶率高,耐藥率突出,Ⅰ型整合子在介導(dǎo)耐藥基因水平轉(zhuǎn)移引起的細菌(多重)耐藥性方面具有重要作用。多粘菌素B等抗菌藥物防突變能力不盡相同,因此,為減少和控制耐藥性的發(fā)生發(fā)展,在臨床使用抗菌藥物時不僅要考慮抗菌藥物的MIC等參數(shù),還要重視菌株的MPC及MSW,以防止耐藥突變菌選擇及