辣根過氧化物酶標(biāo)記二氧化硅納米顆粒的制備及其在免疫分析中的應(yīng)用.pdf

1、本文圍繞一種基于二氧化硅納米顆粒的免疫酶標(biāo)記物的制備方法展開。酶聯(lián)免疫分析(Enzyme—linkedimmunosorbantassay，ELISA)是所有免疫分析方法中應(yīng)用最為廣泛的方法，而基于納米顆粒作為標(biāo)記物的免疫分析方法則是一個(gè)新興的研究熱點(diǎn)，本論文將這兩者結(jié)合在一起開展了相關(guān)的研究。 第一章為緒論，介紹了酶聯(lián)免疫分析的研究進(jìn)展，重點(diǎn)介紹了酶聯(lián)免疫分析的各種標(biāo)記放大手段。 第二章是辣根過氧化物酶標(biāo)記二氧化硅納米

2、顆粒的制備及其在夾心法ELISA中的應(yīng)用。這一章詳細(xì)介紹了辣根過氧化物酶標(biāo)記二氧化硅納米顆粒的及其抗體復(fù)合物制備過程，并以乙肝表面抗原為檢測模型進(jìn)行實(shí)際應(yīng)用。我們通過油包水(W/O)型微乳體系，制備了直徑為50±5nm的二氧化硅納米顆粒，以此為載體，制備了抗體—酶—硅納米顆粒復(fù)合物。通過氨基硅烷修飾在硅納米顆粒的表面引入氨基，然后利用高碘酸鈉氧化法將HRP標(biāo)記在顆粒表面，最后通過氧化葡聚糖的橋接作用將乙肝表面的抗體分子標(biāo)記到酶標(biāo)記的納米

3、顆粒表面。我們考察了三種不同氨基硅烷對(duì)于HRP標(biāo)記效率的影響，利用免疫分析的效果來考察HRP和抗體分子不同的用量對(duì)于酶標(biāo)記二氧化硅納米顆粒—抗體復(fù)合物標(biāo)記效果的影響。最后在最優(yōu)的條件下檢測乙肝表面抗原，其靈敏度達(dá)到0.06ng/mL，線性范圍0.15—12.5ng/mL，對(duì)260份血清樣品的檢測結(jié)果與傳統(tǒng)的ELISA完全一致，對(duì)30份陽性血清樣品的檢測結(jié)果與傳統(tǒng)ELISA相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)r為0.992。 第三章介紹了辣根過氧

4、化物酶標(biāo)記二氧化硅納米顆粒在氯霉素檢測中的應(yīng)用，在這一章中通過檢測小分子藥物氯霉素的實(shí)驗(yàn)來考察辣根過氧化物酶標(biāo)記二氧化硅納米顆粒在競爭型ELISA中應(yīng)用的可行性。實(shí)驗(yàn)中，我們采用了三種不同的免疫分析策略以及兩種氨基硅烷制備的酶標(biāo)記物對(duì)氯霉素進(jìn)行檢測。該方法對(duì)氯霉素檢測的靈敏度最低可以達(dá)到0.012ng/mL，而且線性良好。以我們最終選定的策略和標(biāo)記物進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，回收率在85.01％—101.23％之間，CV在6.89％-25.66％