貝伐單抗與恩度聯(lián)合伊立替康瘤內(nèi)注射治療鼠結(jié)腸癌模型的研究.pdf

1、目的:
　　1.觀察伊立替康(Irinotecan，CPT-11)、貝伐單抗(bevacizumab，Bev)、恩度(Endostar，En)單用及聯(lián)合用藥瘤內(nèi)注射治療裸鼠結(jié)腸癌模型的抗腫瘤療效。
　　2.觀察伊立替康、貝伐單抗、恩度單用及聯(lián)合用藥瘤內(nèi)注射的不良反應(yīng)。
　　3.探討伊立替康、貝伐單抗、恩度單用及聯(lián)合用藥瘤內(nèi)注射后對裸鼠結(jié)腸癌移植瘤組織血管生成和腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
　　方法:培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT-29

2、細(xì)胞，建立BALB/c裸鼠人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞單側(cè)背部皮下移植瘤模型，種瘤后10天，移植瘤體積為150mm3時，將30只裸鼠隨機(jī)分為5組:A組(NS組)、B組(CPT-11組)、C組（Bev+CPT-11組）、D組（Bev+En組）、E組(Bev+CPT-11+En組，給藥途徑均為瘤內(nèi)注射，劑量為Bev5mg/Kg，CPT-1140mg/kg，En10mg/kg。每2天觀察1次，測量移植瘤長徑、短徑，并記錄腫瘤體積（V=0.5×長徑×

3、短徑2），給藥結(jié)束后繼續(xù)觀察12天將全部裸鼠處死。比較各組移植瘤體積增長情況及增長速度;比較各組移植瘤濕重;比較各組抑瘤率(TGI，tumor growth inhibition)、腫瘤倍增時間(DT，thedoubling time)及腫瘤特定生長率（SGR，specific growth rate）。觀察各組裸鼠臟器、淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移情況。評價藥物不良反應(yīng):比較各組裸鼠移植瘤局部破潰出血、消化道反應(yīng)、胃腸道出血穿孔、體重增減情況;比較

4、各組給藥結(jié)束后第8天裸鼠血常規(guī)。免疫組化檢測各組移植瘤組織微血管密度標(biāo)志物CD31、腫瘤細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原Ki67的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:比較觀察各組移植瘤生長情況，并以給藥時間為橫坐標(biāo)，移植瘤體積為縱坐標(biāo)繪制荷瘤鼠移植瘤生長曲線圖，結(jié)果顯示各組移植瘤生長速度由快到慢依次為:A組、D組、B組、C組、E組。觀察結(jié)束時各組移植瘤濕重值從大到小依次為A組:1.30±0.07g;D組，0.83±0.07g;B組，0.69±0.06g;C組

5、，0.50±0.04g;E組，0.30±0.03g，兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除此之外，為評價藥物對移植瘤生長抑制作用大小，我們比較了各組抑瘤率(TGI)、腫瘤倍增時間(DT)及腫瘤特定生長率(SGR)，結(jié)果顯示各組抑瘤療效從小到大依次為:A組、D組、B組、C組、E組，各組TGI、DT、SGR值分別為:A組(DT7.30d, SGR9.50％/d);D組(25.50％,8.52d,8.40％/d);B組(47.57％,9.59d,7.

6、23％/d);C組(67.79％,12.22d,5.67％/d);E組(89.03％,23.89d，2.90％/d)。以上結(jié)果均提示:伊立替康、貝伐單抗、恩度單用或聯(lián)合用藥瘤內(nèi)注射均有抑制裸鼠結(jié)腸癌移植瘤增長的作用，其中貝伐單抗、恩度聯(lián)合伊立替康瘤內(nèi)注射后顯著增強(qiáng)了抑瘤療效。
　　處死裸鼠后解剖檢查裸鼠臟器、淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移情況，發(fā)現(xiàn)各組裸鼠肝臟、脾臟、腹腔、肺均未見腫瘤轉(zhuǎn)移。A組鄰近移植瘤腋窩淋巴結(jié)平均轉(zhuǎn)移個數(shù)為0.5個，腹腔、腹

7、股溝等部位未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，實(shí)驗(yàn)組均未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。
　　各組藥物瘤內(nèi)注射后副反應(yīng)少，觀察期間裸鼠均無移植瘤破潰出血、消化道反應(yīng)、體重減輕、胃腸道出血穿孔、突發(fā)死亡、骨髓抑制現(xiàn)象發(fā)生。
　　為觀察各組藥物瘤內(nèi)注射后對腫瘤血管生成的影響，以免疫組化方法檢測剝離的移植瘤組織微血管標(biāo)志物CD31表達(dá)情況，Weidner法計(jì)算微血管密度，結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組、E組微血管數(shù)分別為每200倍視野:52.5±2.41、50.5±2

8、.88、36.25±2.75、23.30±2.78、21.10±2.43個。A組與B組比較，P=0.204，D組與E組比較，P=0.164，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C、D、E組與A、B組比較，D、E組與C組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A、B組血管紊亂、粗大、扭曲，分支多，大小不一，形態(tài)不規(guī)則，C、D、E組血管變細(xì)，分支減少，大小形態(tài)更統(tǒng)一，其中以D、E組更明顯。結(jié)果提示，恩度增強(qiáng)了貝伐單抗抑制血管新生、血管正常化作用，而伊立替康對腫瘤血管影響

9、較小。
　　為觀察各組藥物瘤內(nèi)注射后對腫瘤細(xì)胞增殖的影響，以免疫組化方法檢測剝離的移植瘤組織腫瘤細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原Ki67表達(dá)情況，200倍鏡下計(jì)數(shù)1000個腫瘤細(xì)胞中Ki67陽性細(xì)胞的數(shù)目為Ki67陽性率，結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組、E組Ki67陽性率分別為:82.71％±5.60％、57.83％±3.92％、45.68％±3.29％、70.88％±4.03％、29.32％±2.61％，兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果提示

10、，伊立替康抑制腫瘤細(xì)胞增殖，貝伐單抗、恩度抑制腫瘤細(xì)胞作用較弱，貝伐單抗、恩度與伊立替康聯(lián)用后顯著增強(qiáng)了抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
　　結(jié)論:
　　1.伊立替康、貝伐單抗、恩度單用或聯(lián)合用藥瘤內(nèi)注射均有抑制裸鼠結(jié)腸癌移植瘤增長的作用，其中貝伐單抗、恩度聯(lián)合伊立替康瘤內(nèi)注射后顯著增強(qiáng)了抑瘤療效。
　　2.伊立替康、貝伐單抗、恩度單用或聯(lián)合用藥瘤內(nèi)注射副反應(yīng)少，無移植瘤局部破潰出血、消化道反應(yīng)、胃腸道穿孔、體重減輕、骨髓抑制