結(jié)直腸癌聯(lián)合靶向治療中貝伐單抗影響CD151基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究結(jié)腸癌接受常規(guī)化療和聯(lián)合抗VEGF靶向藥物治療后，對(duì)比觀察腫瘤組織中CD151蛋白的表達(dá)情況情況對(duì)微血管生長(zhǎng)的影響，探討在結(jié)腸癌化療中CD151蛋白的表達(dá)影響腫瘤血管生成的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29由河北中醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室張偉老師惠贈(zèng)，45只BALB/c-nu/nu雄性裸鼠，購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成對(duì)照組（A組），化療治療組（B組）和化療聯(lián)合靶向藥物治療組（

2、C組）。各組存活裸鼠形成可見(jiàn)瘤體后，于起始日日晨分別向A組裸鼠灌喂生理鹽水，根據(jù)體重向B、C組按每克體重0.3mg給予裸鼠灌喂30mg/ml的卡培他濱生理鹽水溶液，灌喂卡培他濱當(dāng)日同樣按每克體重0.01mg向C組實(shí)驗(yàn)裸鼠腹膜腔內(nèi)注射5mg/ml的貝伐單抗溶液。
　　2、通過(guò)Western blot方法分別檢測(cè)各組移植瘤組織中CD151蛋白的表達(dá)情況。
　　3、通過(guò)免疫組化的方法使用CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，在光學(xué)顯微鏡下觀察

3、各組移植瘤組織的微血管密度（MVD）。
　　4、運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、HT29結(jié)腸癌細(xì)胞在鏡下呈梭型或不規(guī)則三角形,大小形態(tài)不一，中央為卵圓形核，核增大且畸形，細(xì)胞核與胞質(zhì)比例失調(diào)，甚至接近1:1，細(xì)胞與細(xì)胞聚集成群，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，傳代順利，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2、HT29結(jié)腸癌細(xì)胞接種后，所有裸鼠生存狀態(tài)為可耐受種植瘤，各組裸鼠第7天均可觀察到肉眼可見(jiàn)的瘤體

4、生長(zhǎng)，成瘤率均為100％；各組裸鼠從第8天給予藥物灌喂，給藥后所有存活裸鼠生存狀態(tài)為可耐受，飲食狀況可。對(duì)照組裸鼠死亡2只，死亡率13.33%，化療治療組裸鼠死亡1只，死亡率6.67%，化療聯(lián)合靶向藥物治療組裸鼠死亡1只，死亡率6.67%。
　　3、各組移植瘤體積生長(zhǎng)曲線顯示前6天生長(zhǎng)速度基本一致，其后腫瘤生長(zhǎng)出現(xiàn)明顯差異，對(duì)照組移植瘤生長(zhǎng)速度明顯高于化療組和聯(lián)合治療組，后兩者相比，化療組腫瘤的生長(zhǎng)速度快于聯(lián)合治療組，第21天處死

5、動(dòng)物剝?nèi)×鲶w體積對(duì)比：對(duì)照組移植瘤體積為（1187±219.69）mm3；化療治療組移植瘤體積為（757.2±69.68）mm3；化療聯(lián)合靶向藥物治療組移植瘤體積為（532.3±40.12）mm3；有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。各組移植瘤瘤重對(duì)比：對(duì)照組移植瘤瘤重為（1.42±0.26）g；化療治療組移植瘤瘤重為（0.901±0.082）g；化療聯(lián)合靶向藥物治療組移植瘤瘤重為（0.629±0.04）g；有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。對(duì)照

6、組移植瘤生長(zhǎng)或增殖明顯高于化療治療組和化療聯(lián)合靶向藥物治療組，且化療治療組的移植瘤重于化療聯(lián)合靶向藥物治療組。
　　4、Western-blot方法分別檢測(cè)對(duì)照組、化療治療組、化療聯(lián)合靶向藥物治療組的CD151蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與對(duì)照組裸鼠移植瘤組織中CD151蛋白表達(dá)相比，化療治療組、化療聯(lián)合靶向藥物治療組移植瘤組織中CD151蛋白表達(dá)明顯降低，其化療治療組移植瘤組織中CD151蛋白表達(dá)高于化療聯(lián)合靶向藥物治療組移植瘤組織

7、中CD151蛋白的表達(dá)量。對(duì)照組蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度值為（1.13±0.082）；化療治療組蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度值為（0.92±0.054）；化療聯(lián)合靶向藥物組蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度值為（0.75±0.031），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　5、各組移植瘤組織經(jīng)CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞后微血管計(jì)數(shù)（MVD）結(jié)果示：對(duì)照組（70.04±9.80），化療治療組為（59.95±6.54），化療聯(lián)
　　合靶向藥物治療組為（43.46±

8、2.98）。結(jié)果顯示對(duì)照組、化療治療組及化療聯(lián)合靶向藥物治療組組織中微血管計(jì)數(shù)呈下降趨勢(shì)，提示各組移植瘤組織中微血管增殖情況也存在明顯差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、在接受化療和聯(lián)合靶向藥物治療的結(jié)腸癌組織中，CD151蛋白的表達(dá)均呈下降趨勢(shì)，同時(shí)伴有腫瘤組織血管生成的減少，提示CD151蛋白可能參與腫瘤血管生成的調(diào)控。
　　2、接受聯(lián)合靶向藥物的結(jié)腸癌組織中血管增殖密度明顯低于單純化療組，考慮CD151蛋