脂肪酸合成酶(FAS)在大鼠子宮、乳腺組織的表達(dá)及與雌激素關(guān)系的探討.pdf

1、研究目的：
　　 20世紀(jì)90年代初，脂肪酸合成酶（fattyacidsynthase，F(xiàn)AS）首次作為癌抗原在乳腺癌組織中被發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AS與細(xì)胞增殖、腫瘤的惡性分級及患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。此后，研究者陸續(xù)在卵巢癌，子宮內(nèi)膜癌，前列腺癌等性激素敏感性腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)FAS均呈高水平表達(dá)。研究表明性激素可上調(diào)性激素敏感性腫瘤組織中FAS的表達(dá)，其中包括雌、孕、雄激素。FAS為快速生長的細(xì)胞提供胞膜磷脂，是腫瘤細(xì)胞能量的主要來源。故推

2、測，F(xiàn)AS可能參與了細(xì)胞過度生長甚至發(fā)生癌變的機(jī)制。然而關(guān)于正常性激素敏感組織中FAS調(diào)節(jié)機(jī)制的研究尚未見報(bào)道。正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為有著本質(zhì)不同，從腫瘤細(xì)胞中得到的理論依據(jù)是否適用正常細(xì)胞，尚需更多的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證。子宮既是對雌激素最為敏感的組織又周期性處于增殖狀態(tài)，長期持續(xù)雌激素作用可明顯促進(jìn)子宮內(nèi)膜增生甚至發(fā)生癌變，所以在臨床激素治療中，對子宮內(nèi)膜的保護(hù)最受重視，但同時也需考慮乳腺的問題。
　　 因此，本研究重點(diǎn)

3、關(guān)注子宮和乳腺。首先通過長期外源性雌激素作用去勢大鼠，探討雌激素對子宮及乳腺FAS表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。通過檢測大鼠不同生長發(fā)育階段子宮及乳腺組織FAS的表達(dá)譜，推測FAS對發(fā)育及衰老的影響。觀察中年大鼠動情周期不同階段、動情周期不規(guī)以及給予雌激素受體拮抗劑后宮及乳腺組織FAS的表達(dá)，初步探索短期內(nèi)源性雌激素波動對FAS表達(dá)的影響。最后通過檢測婦女月經(jīng)周期不同階段及異常增生狀態(tài)子宮內(nèi)膜中FAS的表達(dá)，結(jié)合動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，試圖提出臨床建議。

4、>　　 研究方法：
　　 1、雌激素作用研究組：3月齡雌性SD大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham，6只)，單純?nèi)萁M（OVX，8只）和去勢后不同劑量戊酸雌二醇灌胃組。戊酸雌二醇給藥劑量分別為0.05mg/kg（7只），0.1mg/kg（10只），0.2mg/kg（10只），0.4mg/kg（10只），0.8mg/kg組（9只），其中0.2mg/kg相當(dāng)于60kg體重婦女每日口服2mg戊酸雌二醇。Sham和OVX組給予相同體

5、積的生理鹽水灌胃。給藥時間為每日一次，連續(xù)2個月。
　　 2、生長發(fā)育研究組：分別選取出生4周、6周、8周、3月、6月、9月、12月、16月等不同生長發(fā)育階段的雌性SD大鼠，每組7只，動情周期規(guī)律者于動情間期取材，動情周期不規(guī)律者任意時間取材。
　　 3、中年大鼠動情周期研究組：根據(jù)陰道涂片結(jié)果選擇中年雌性SD大鼠（13月齡）動情周期尚且規(guī)律者，隨機(jī)分為動情前期、動情期、動情后期及動情間期，每組7只。動情周期不規(guī)律者，根

6、據(jù)陰道涂片結(jié)果為持續(xù)動情期表現(xiàn)者定義為“周期不規(guī)律-a”，為持續(xù)動情間期表現(xiàn)者定義為“周期不規(guī)律-b”。
　　 4、雌激素拮抗劑研究組：選擇10月齡雌性SD大鼠行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，術(shù)后2個月，分別給予戊酸雌二醇(1.0mg/kg)灌胃以及戊酸雌二醇(1.0mg/kg)灌胃+ICI182，780(500ug/d)皮下注射，每天1次，連續(xù)5天，每組6只。
　　 5、婦女子宮內(nèi)膜研究組：選擇婦女年齡在35-60歲，因不規(guī)則子宮出

7、血而行診斷性刮宮者，根據(jù)病理診斷結(jié)果，分為增殖期子宮內(nèi)膜、分泌期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜單純性增生和子宮內(nèi)膜不典型增生，每組5例。
　　 檢測指標(biāo)：(1)大鼠：全身體脂分布；子宮濕重及子宮濕重/體總質(zhì)量比；血清雌二醇(E2)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、游離脂肪酸(FFA)、非高密度脂蛋白膽固醇(nonHDL-C)；子宮及乳腺組織FAS及增殖核抗原K167蛋白；子宮及乳腺組織FAS，ER-α，

8、SREBP-1c基因。(2)婦女：子宮內(nèi)膜組織FAS、Ki67及ER蛋白。
　　 研究結(jié)果：
　　 1、雌激素作用研究組
　　 (1)體脂分布：總質(zhì)量及全身脂肪百分含量均在OVX組最高，0.8mg/kg戊酸雌二醇組最低。
　　 (2)子宮濕重及子宮濕重/體重比：Sham組最高，0.8mg/kg戊酸雌二醇組次之，OVX組最低，隨給藥劑量增加而增加。
　　 (3)血E2及血脂譜：E2水平隨著給藥劑量增

9、加而增加。血清TC，nonHDL-C及FFA水平變化趨勢相似，均在0.8mg/kg戊酸雌二醇組最低，OVX組最高，隨給藥劑量增加呈降低趨勢。
　　 (4)子宮及乳腺組織FAS基因的表達(dá)：免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示大鼠子宮及乳腺組織均有FAS的表達(dá)，且陽性強(qiáng)度與增殖核抗原Ki67的陽性細(xì)胞比率正相關(guān)?；驒z測結(jié)果顯示，F(xiàn)ASmRNA在OVX組最低，0.8mg/kg戊酸雌二醇組最高，甚至高于假手術(shù)組，而在0.05-0.2mg/kg戊酸雌二

10、醇組FAS表達(dá)水平相對平穩(wěn)。ER-α及SREBP-1c表達(dá)水平的趨勢與FAS相似。
　　 2、生長發(fā)育研究組
　　 (1)體脂分布：隨年齡增長，總質(zhì)量及全身脂肪百分含量逐漸增加。
　　 (2)子宮濕重及子宮濕重/體重比：于4周齡最低，6周明顯升高，8周-9月齡變化不明顯，9月后開始明顯下降。
　　 (3)血E2及血脂譜：血E2水平在4周和6周較低，性成熟后相對穩(wěn)定，TC和nonHDL-C變化趨勢相似并存在

11、3個高點(diǎn)，分別在生后4周，9月和16月，其中生后9月齡最高。TG及FFA隨月齡增長而升高。
　　 (4)子宮及乳腺組織FAS基因的表達(dá)：①子宮FAS在4-8周呈線性升高趨勢，8周-16月變化不明顯，ER-α在3、6、9月齡明顯高于年輕及老年組，SREBP-1c無明顯變化。②乳腺FAS隨月齡增長而增加，9月齡達(dá)到最高，此后降低，ER-α在3、6月齡組明顯高于其他各組，SREBP-1c水平在9月齡達(dá)到最高。
　　 3、中年大

12、鼠動情周期及雌激素拮抗劑研究組
　　 (1)體脂分布：總質(zhì)量及全身脂肪百分含量無明顯差異。
　　 (2)子宮濕重及子宮濕重/體重比：動情周期不同階段無明顯差異，1.0mg/kg戊酸雌二醇+ICI182，780組低于單純1.0mg/kg戊酸雌二醇組。
　　 (3)血E2及血脂譜：血E2水平在動情前期、動情期明顯高于動情后期、動情間期及周期不規(guī)律者，動情周期不同階段血脂譜無明顯差異，TC、nonHDL-C水平在1.0

13、mg/kg戊酸雌二醇組及1.0mg/kg戊酸雌二醇+ICI182，780組較低。
　　 (4)子宮及乳腺組織FAS基因的表達(dá)：動情周期不同階段子宮及乳腺組織FAS表達(dá)無明顯差異；FAS和ER-α在子宮組織的表達(dá)在1.0mg/kg戊酸雌二醇組明顯高于1.0mg/kg戊酸雌二醇+ICI182，780組，但在乳腺組織FAS和ER-α表達(dá)無明顯差異。
　　 4、婦女子宮內(nèi)膜研究組
　　 FAS在增殖期子宮內(nèi)膜表達(dá)明顯高于

14、分泌期，同時伴隨Ki67和ER高表達(dá)。FAS和Ki67在單純性增生和不典型增生子宮內(nèi)膜中表達(dá)似高于增殖期子宮內(nèi)膜。
　　 結(jié)論：
　　 1、外源性雌激素長期作用可通過雌激素受體在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)FAS表達(dá)，當(dāng)雌激素低于治療劑量時，F(xiàn)AS表達(dá)水平相對穩(wěn)定，當(dāng)雌激素明顯高于治療劑量時，F(xiàn)AS表達(dá)水平高于生理狀態(tài)。提示雌激素對FAS的上調(diào)作用可能存在一個適宜劑量范圍。
　　 2、從性幼稚期到性成熟期，子宮及乳腺組織FAS表