產耐高溫淀粉酶菌株的篩選及離子束誘變研究.pdf

1、淀粉和糖原是發(fā)酵工業(yè)中最常用的有機物質資源,目前對淀粉和糖原降解利用多數(shù)是通過化學的方法,但化學方法成本較高,而利用微生物有更多的優(yōu)點,例如環(huán)保、成本低。微生物發(fā)酵多數(shù)是高溫在下進行的,但能在高溫下把淀粉和糖原降解的耐高溫α-淀粉酶產生菌種類較少,因此對耐高溫α-淀粉酶產生菌的篩選及人工改造是未來淀粉利用的重要途徑。本研究通過對多種不同的土壤進行高溫淀粉酶菌株篩選和鑒定,利用離子束對篩選菌株進行誘變選育高酶活的突變菌株,并對突變菌的發(fā)酵

2、條件和分子變異進行了初步研究,主要結果如下： 1.從安徽具有典型高溫環(huán)境地區(qū)的近100份土樣中篩選分離到11株產高溫淀粉酶的菌株,對其中一株酶活較高的菌株RL,經(jīng)形態(tài)觀察、16SrDNA測序分析,證實該菌株為解淀粉芽孢桿菌。 2.利用Ar+N+兩種低能離子注入RL進行誘變,研究存活率和突變率,在相同的能量和劑量下,Ar+誘變存活率低于N+,但是N+注入的平均突變率明顯高于Ar+。經(jīng)過對誘變條件系統(tǒng)地研究,得到出發(fā)菌株最適

3、的注入離子為N+,適宜的注入能量為10keV、注入劑量為2.08×1015ions/cm2。 3.經(jīng)過兩輪誘變和篩選,得到了1株高產高溫淀粉酶突變菌株RL-1,經(jīng)傳代實驗表明該菌株在降解淀粉的遺傳性狀上表現(xiàn)穩(wěn)定,測定突變株RL-1酶活提高了57.1％。 4.對RL-1菌株耐高溫淀粉酶進行酶學性質分析,結果顯示該酶的最適反應溫度為75℃,屬高溫淀粉酶,最適反應pH為6.5,60℃以上保溫80 min仍可保持80％左右的酶活