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文檔簡介
1、目的:觀察蛋白激酶B(AKT)與細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)在正常和骨性關(guān)節(jié)炎(OA)軟骨細(xì)胞中的表達(dá),探討AKT與ERK1/2在OA病程中的意義。
方法:手術(shù)中取18例OA人膝關(guān)節(jié)軟骨組織(患者年齡60-78歲)和5例正常關(guān)節(jié)軟骨組織(患者年齡23-40歲),培養(yǎng)人軟骨細(xì)胞,并甲苯胺藍(lán)染色、免疫組化鑒定與觀察聚集蛋白聚糖及Ⅱ型膠原在正常與OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá); Western blotting技術(shù)檢測AKT、p-
2、AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、磷酸化核糖體S6蛋白激酶(p-P70S6K)及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白在正常/OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)水平;實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測聚集蛋白聚糖及Ⅱ型膠原在正常/OA軟骨細(xì)胞中mRNA表達(dá)水平;包埋制備切片,免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察p-AKT及p-ERK1/2在OA與正常軟骨組織中的表達(dá)。
結(jié)果:與正常軟骨細(xì)胞比較,OA軟骨細(xì)胞內(nèi)p-AKT、p-P70S6K蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05),且
3、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型膠原mRNA在OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá)水平降低(P<0.05),而p-ERK1/2、PCNA蛋白表達(dá)明顯提高(P<0.05)。同時,p-AKT在OA軟骨組織中整體表達(dá)水平低于正常軟骨組織(P<0.05);而p-ERK1/2在OA軟骨組織中整體表達(dá)水平高于正常軟骨組織(P<0.05)。
結(jié)論:AKT可能通過p-P70S6K而調(diào)節(jié)OA軟骨細(xì)胞外基質(zhì)聚集蛋白聚糖及Ⅱ型膠原的合成;ERK1/2可能通過PCNA而調(diào)控OA軟
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