重組人白介素1受體拮抗劑的臨床前免疫毒性研究.pdf

1、白介素1受體拮抗劑（Interleukin-1 receptor antagonist，IL-1Ra）為IL-1家族的一份子，能特異性的阻斷IL-1與IL-1R的結合，從而抑制IL-1的活性。我們的研究發(fā)現(xiàn)，重組人白介素-1受體拮抗劑（recombinant human Interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra）能有效的預防化療相關性腹瀉，對此我們進行rhIL-1Ra新藥的臨床前和臨床研究。<

2、br>　　作為新的生物技術藥物，在進入最終臨床試驗和最終的批準前，需要進行非臨床藥物安全性評價。免疫毒性研究是生物技術藥物非臨床安全性評價的一個重要內容。在免疫毒性研究過程中，我們通過對豚鼠的全身主動過敏實驗，發(fā)現(xiàn)試驗結果呈極強陽性，說明rhIL-1Ra對豚鼠有免疫毒性。通過對SD大鼠和食蟹猴重復給藥過程中抗rhIL-1Ra結合抗體和中和抗體的檢測觀察rhIL-1Ra的免疫原性。
　　采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme-link

3、ed immunosorbent assay，ELISA）測定血清中的抗rhIL-1Ra結合抗體。經(jīng)方法研究確定抗原的包被濃度10ug/ml，酶標抗體的使用滴度為1：5000，陽性對照血清的工作濃度為1：10000，待測血清從1：100開始稀釋，血清經(jīng)過反復凍融三次后不影響測定。采用A375.S2細胞(人黑色素瘤細胞)體外殺傷實驗測定血清中的抗rhIL-1Ra中和抗體。經(jīng)方法研究確定了方法的可行性，檢測時待測血清1：40后使用，當對照血

4、清的rhIL-1Ra中和率在32.61％以內時實驗結果方有效，大鼠待檢血清中抗rhIL-1Ra中和抗體陰陽性判定標準為中和率≥59.40%，食蟹猴為≥71.76%。SD大鼠肌肉注射給予rhIL-1Ra四周恢復期四周，劑量為0、5、15和30 mg/kg，實驗結果表明，在劑量≥5 mg/kg下給藥兩周后可誘導產(chǎn)生結合抗體，給藥四周后誘導產(chǎn)生中和抗體。食蟹猴每天一次連續(xù)給藥4周，恢復期28天，劑量為0、2.5、7.5和15.0 mg/kg。