不同方式的非血管化結(jié)構(gòu)性骨移植對骨缺損修復(fù)的實驗研究.pdf

1、目的：研究非血管化結(jié)構(gòu)性骨移植，在骨缺損靶區(qū)域與骨小梁或骨應(yīng)力不同方向的植骨方式，對骨愈合微環(huán)境的影響，分析其可能存在的原理及機制。通過對植骨后骨缺損靶區(qū)域微環(huán)境的指標測定，從影像學(xué)及微觀結(jié)構(gòu)對骨缺損不同植骨方式的修復(fù)重建作進一步深入研究。為臨床治療骨缺損這一難題開拓新思路、提供新方法。
　　方法：本實驗首先建立骨缺損模型，選同產(chǎn)地、4-6個月、體重2.5-3.5kg的新西蘭大白兔38只，雌雄不限，在一側(cè)股骨中段截骨15mm(包括

2、骨膜)，骨斷端用骨蠟封閉髓腔，微型鋼板固定股骨，維持骨斷端15mm間距，于12周后經(jīng)X線確定骨缺損情況。
　　選取已制成骨缺損模型的新西蘭大白兔38只(保留2只)，隨機均分A、B、C、三組，每組12只。以3％戊巴比妥鈉經(jīng)耳緣靜脈注射進行麻醉，取同一側(cè)自體髂骨作植骨來源，并將所取髂骨沿骨小梁或應(yīng)力方向剪成大小相等8塊。先取出制作股骨缺損模型的鋼板螺釘，清理骨缺損處纖維組織、硬化骨，復(fù)通髓腔，復(fù)位，對線良好，微型鋼板、螺釘內(nèi)固定。A組

3、按照髂骨塊應(yīng)力(骨小梁)方向平行股骨縱軸方向植于股骨缺損區(qū)；B組按照髂骨塊應(yīng)力(骨小梁)方向垂直股骨縱軸方向植于股骨缺損區(qū)；C組將髂骨塊隨機植于股骨缺損區(qū)。術(shù)后自制夾板固定2周。分別于2、4、8周三個時間點進行檢測，每個時間點每組隨機抽取4只大白兔，檢測指標為：1、觀察動物的一般情況，包括術(shù)后觀察體溫、活動、精神、胃納、傷口愈合情況。2、對實驗側(cè)股骨行X-Ray檢查，大體觀察了解骨缺損修復(fù)情況及骨痂生長情況，應(yīng)用計算機圖像分析處理軟件測

4、出植骨區(qū)平均光密度值，三組對照，計算光密度指數(shù)。3、空氣栓塞法處死動物，迅速將所取標本置固定液保存、脫鈣、脫水、蠟塊包埋等處理，制作切片，厚4um，HE染色、CD34染色，用免疫組織化學(xué)方法對植骨區(qū)的陽性細胞占測量窗的面積(％)和新生骨生成量進行記錄。第4、8周同法處理。
　　結(jié)果：
　　1.骨缺損模型的可靠性
　　骨缺損模型制作12周后，X線檢查顯示：骨缺損區(qū)域無骨性連接，髓腔閉塞，斷端硬化，兩側(cè)斷端出現(xiàn)少量骨痂。大

5、體標本：有少量比較薄的骨痂，骨缺損區(qū)為纖維瘢痕組織填充，缺損范圍為：13-14mm，符合骨標準缺損(criticalsizedefect，CSD)要求。
　　2.一般情況觀察
　　三組實驗兔，1只因麻醉死亡，1只可能手術(shù)創(chuàng)傷過大第二日死亡，將備留的2只實驗兔替代進入實驗步驟。在整個實驗期內(nèi)，所有實驗動物都進行結(jié)果分析，動物生長良好，麻醉全醒后自由活動，切口均無紅腫、滲出，不需拆線。各組實驗兔至處死前籠內(nèi)活動正常，移植骨無移位

6、，鋼板螺釘無松動、斷裂，未出現(xiàn)繼發(fā)骨折。
　　3.大體標本觀察
　　術(shù)后不同時期未見骨缺損區(qū)域周圍軟組織變性、壞死，表面有纖維結(jié)締組織。后期缺損區(qū)骨痂增粗、增大，皮質(zhì)骨連續(xù)。
　　4.X線觀察結(jié)果
　　2周時，移植骨均有變小，三組骨缺損區(qū)域界線清楚。A組，有少量斑片狀陰影；B組，骨缺損區(qū)域無明顯骨痂形成；C組，可見骨缺損區(qū)域有少量云霧狀陰影形成。
　　4周時：A組，骨缺損區(qū)域界線模糊，有大量骨痂形成；B組，

7、骨缺損區(qū)域有骨痂形成，移植骨界線清楚；C組，骨缺損區(qū)域模糊不清，較B組骨痂生長明顯。
　　8周：A、B、C三組骨缺損區(qū)域移植物界線模糊，大量骨痂形成，骨皮質(zhì)形成、連續(xù)，髓腔未完全相通。
　　各組骨缺損區(qū)光密度指數(shù)隨時間呈增加趨勢，第4周時，A組與B組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C組與B組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；A組與C組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。第2、8周時，各組骨缺損區(qū)光密度指數(shù)比較，P>0.

8、05，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.標本病理結(jié)果
　　5.1.免疫組化陽性細胞占測量窗的面積(％)術(shù)后2周：各組骨缺損區(qū)域血管明顯增生，A組>C組>B組，PA-B<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義；PC-B<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義；PA-C<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周：PA-B<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義；PC-B>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義；PA-C>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后8周：A、B、C三組間陽性細胞占測量窗的面積(％)接近(P>0

9、.05)，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　5.2組織切片新生骨生成量術(shù)后2周：各組骨缺損區(qū)有不同程度的新骨生成，A、B、C三組間比較P<0.05，有統(tǒng)計意義；術(shù)后4周：各組骨缺損區(qū)新生骨生成量較兩周時明顯增多，PA-B<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義；PC-B<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義；PA-C>0.05無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后8周：A、B、C三組間比較P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：非血管化結(jié)構(gòu)性骨移植在治療骨缺損時，按骨小梁或應(yīng)力方向不