廣東潮汕人群MMP15基因及TGFβ2基因多態(tài)性與慢性阻塞性肺疾病的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分：
　　研究背景和目的：
　　慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種具有氣流受限不完全可逆特征且呈進(jìn)行性發(fā)展的疾病，與氣道和肺部對(duì)有害顆?；蛴泻怏w的慢性炎癥反應(yīng)增強(qiáng)相關(guān)。COPD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與多個(gè)基因變異及環(huán)境因素相互作用有關(guān)。人類基因組計(jì)劃和HapMap的完成使COPD這類復(fù)雜疾病的遺傳學(xué)GWAS（全基因組關(guān)聯(lián)研究）成為現(xiàn)實(shí)。肺通氣功能是評(píng)

2、價(jià)氣流受限程度的客觀指標(biāo)以及COPD的重要表型，肺功能相關(guān)的基因位點(diǎn)也是COPD的重要候選基因。2012年Soler Artigas等發(fā)表了最新的肺功能GWAS數(shù)據(jù)，其中MMP15基因rs12447804位點(diǎn)與FEV1/FVC顯著相關(guān)（P<5×10-8）。MMP15基因rs12447804位點(diǎn)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中第一個(gè)被報(bào)道的與肺功能相關(guān)的基因位點(diǎn)。
　　MMPs/TIMPs平衡失調(diào)在COPD發(fā)病中的作用不容忽視，MMP15屬于

3、基質(zhì)金屬蛋白酶家族，與家族中其他的MMPs一樣具有廣泛的蛋白水解活性。當(dāng)MMP15基因的改變引起其活性變化，影響蛋白酶-抗蛋白酶間的平衡狀態(tài)時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致COPD的發(fā)生。本研究通過(guò)對(duì)廣東潮汕地區(qū)158例漢族人MMP15基因多態(tài)性與COPD易感性的研究，以期能篩選出COPD的易感基因。
　　研究對(duì)象和方法：
　　在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院篩選158例COPD患者和沒(méi)有任何呼吸系統(tǒng)疾病的201例健康體檢者，所收集的COPD患者

4、均符合2011年發(fā)表的全球COPD創(chuàng)議（GOLD指南）制訂的慢性阻塞性肺疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有受試者及其三代直系親屬均為潮汕籍人。抽取所有研究對(duì)象外周血2-3ml，提取血液白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測(cè)兩組研究對(duì)象MMP15基因rs12447804位點(diǎn)等位基因和基因型，同時(shí)收集兩組樣本的臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1. MMP15基因rs124

5、47804位點(diǎn)C/T多態(tài)性在潮汕地區(qū)正常人群中的分布為：CC型32.4％、CT型53.2%，TT型14.4%，等位基因C：59%、T：41%，男女之間基因型及等位基因頻率無(wú)顯著差異（P<0.05）。與中國(guó)北京地區(qū)、日本和拉丁裔美國(guó)人群沒(méi)有顯著性差異，但與歐洲、非洲和非裔美國(guó)人群相比差異顯著（P<0.01）
　　2. COPD組與對(duì)照組對(duì)比，MMP15基因 rs12447804C/T多態(tài)位點(diǎn)等位基因分布無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.05

6、4），而基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.048），但經(jīng)年齡、性別、BMI、吸煙指數(shù)矯正后，基因型分布在兩組間無(wú)明顯差異（P=0.087）。共顯性遺傳模式下，與CC基因型相比，COPD組中TT基因型頻率與對(duì)照組相比略增高（P=0.05, OR2.098,95%CI:1.000-4.399），統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著。隱形遺傳模式下，與CC+CT基因型相比，COPD組中TT基因型頻率與對(duì)照組相比明顯增高（P=0.027,OR2.099,95%

7、CI:1.089-4.048）。顯性遺傳模式下，與 CC基因型相比，COPD組中 CT+TT基因型頻率與對(duì)照組無(wú)差異（P=0.474）。
　　3. COPD組不同基因型患者間性別組成、年齡、吸煙指數(shù)、肺功能指標(biāo)（FEV1及FEV1/FVC）、呼吸困難程度（mMRC評(píng)分）的比較上無(wú)明顯差異，但體重指數(shù)（BMI）在三組間的比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（CC vs CT: P=0.008）。不同GOLD分組間比較，三種基因型的分布無(wú)明顯差異。

8、r>　　結(jié)論：
　　1.廣東潮汕地區(qū)正常人群MMP15基因rs12447804位點(diǎn)C/T多態(tài)性在男女之間基因型及等位基因頻率無(wú)顯著差異，與中國(guó)北京地區(qū)、日本和拉丁裔美國(guó)人群相比沒(méi)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但與歐洲、非洲和非裔美國(guó)人群相比差異顯著。
　　2. MMP15基因rs12447804位點(diǎn)C/T多態(tài)性和廣東潮汕人群COPD的發(fā)病相關(guān)。攜帶C基因可明顯較少COPD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。與CC基因型相比，TT基因型明顯增加慢性阻塞性肺病的發(fā)

9、病風(fēng)險(xiǎn)，TT基因型可能是慢性阻塞性肺病的遺傳學(xué)危險(xiǎn)因素。
　　3. MMP15基因rs12447804位點(diǎn)C/T多態(tài)性和COPD的病情嚴(yán)重程度可能無(wú)相關(guān)。
　　4. COPD患者體重指數(shù)較正常人群明顯降低，其中CT基因型患者的體重指數(shù)較CC型組明顯減少，營(yíng)養(yǎng)水平降低，說(shuō)明其病情及臨床體征可能較CT型患者更加嚴(yán)重。BMI能作為預(yù)測(cè)患者發(fā)生慢性阻塞性肺病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　第二部分：
　　研究背景和目的：
　

10、　慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種具有氣流受限不完全可逆特征且呈進(jìn)行性發(fā)展的疾病，與氣道和肺部對(duì)有害顆?；蛴泻怏w的慢性炎癥反應(yīng)增強(qiáng)相關(guān)。COPD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與多個(gè)基因變異及環(huán)境因素相互作用有關(guān)。人類基因組計(jì)劃和HapMap的完成使COPD這類復(fù)雜疾病的遺傳學(xué)GWAS（全基因組關(guān)聯(lián)研究）成為現(xiàn)實(shí)。肺通氣功能是評(píng)價(jià)氣流受限程度的客觀指標(biāo)以及COPD的重要表型，

11、肺功能相關(guān)的基因位點(diǎn)也是COPD的重要候選基因。2012年Soler Artigas等發(fā)表了最新的肺功能GWAS數(shù)據(jù)，其中TGFβ2基因rs993925位點(diǎn)與FEV1/ FVC顯著相關(guān)（P<5×10-8），之后Cho MH等對(duì)多個(gè)全基因組關(guān)聯(lián)分析結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，共包括6633位中到重度COPD患者和5704位對(duì)照組個(gè)體，最新發(fā)現(xiàn)TGFβ2基因和COPD顯著相關(guān)（P<8.3×10-9）。
　　轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）是參與C

12、OPD慢性炎癥反應(yīng)的一種炎癥介質(zhì)。TGFβ2的過(guò)多表達(dá)會(huì)促進(jìn)氣道的細(xì)胞外基質(zhì)中膠原蛋白沉積而導(dǎo)致氣道重塑，因此當(dāng)TGFβ2基因單核苷酸多態(tài)性影響其表達(dá)水平的變化時(shí)，可能會(huì)在COPD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有相關(guān)文獻(xiàn)研究TGFβ2基因rs993925位點(diǎn)與COPD易感性的關(guān)聯(lián)，本研究通過(guò)病例-對(duì)照研究方法來(lái)了解TGFβ2基因多態(tài)性在廣東潮汕人群的分布特點(diǎn)，初探其與COPD的發(fā)病及病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性。
　　研究對(duì)象和方法：

13、
　　在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院篩選158例COPD患者和沒(méi)有任何呼吸系統(tǒng)疾病的201例健康體檢者，所收集的COPD患者均符合2011年發(fā)表的全球COPD創(chuàng)議（GOLD指南）制訂的慢性阻塞性肺疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有受試者及其三代直系親屬均為潮汕籍人。抽取所有研究對(duì)象外周血2-3ml，提取血液白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測(cè)兩組研究對(duì)象TGFβ2基因rs993925 G/A位點(diǎn)等位基因

14、和基因型，同時(shí)收集兩組樣本的臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1. TGFβ2基因rs993925位點(diǎn)G/A多態(tài)性在潮汕地區(qū)正常人群中的分布為：GG型29.4%、GA型50.7%，AA型19.9%，等位基因G：54.79%、A：45.3%，男女之間基因型及等位基汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文
　　因頻率無(wú)顯著差異（P<0.05）。與中國(guó)北京地區(qū)、日本和歐洲人群沒(méi)有顯著性差異，但與非洲人群相

15、比差異顯著（P<0.01）。
　　2.CHF組和對(duì)照組相比，TGFβ2基因rs993925 G/A多態(tài)位點(diǎn)GG、GA、AA基因型頻率在COPD組中分別為25.9%、55.1%和19.0%，在對(duì)照組中分別為29.4%、50.7%和19.9%，G和A等位基因的頻率在COPD組中分別為0.535和0.465，在對(duì)照組分別為0.547和0.453，該位點(diǎn)基因型和等位基因分布在COPD組與對(duì)照組P值分別為0.698，0.740，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)

16、學(xué)意義。不管在顯性、隱性或共顯性遺傳模式中，TGFβ2基因rs993925 G/A多態(tài)性均與COPD的發(fā)病無(wú)相關(guān)性。
　　3.COPD組不同基因型患者間性別組成、年齡、吸煙指數(shù)、體重指數(shù)（BMI）、肺功能指標(biāo)（FEV1及FEV1/FVC）、呼吸困難程度（mMRC評(píng)分）的比較上無(wú)明顯差異。不同GOLD分組間比較，三種基因型的分布無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1.廣東潮汕地區(qū)正常人群TGFβ2基因rs993925位點(diǎn)G/A