促進(jìn)劑對(duì)樺褐孔菌液體深層發(fā)酵多酚的產(chǎn)生、活性和組成的影響.pdf

1、樺褐孔菌（Inonotus obliquus），是一種屬于真菌門(mén)、擔(dān)子菌門(mén)、傘菌亞門(mén)、傘菌綱、銹革孔菌目、銹革孔菌科、纖孔菌屬的藥用真菌。我們又稱之為為黑樺菌、白樺茸等，素來(lái)都有“西伯利亞靈芝”之美稱。樺褐孔菌被作為一種神奇的藥物，主要?dú)w因于這種真菌含有多種次級(jí)代謝產(chǎn)物，如多糖、三萜、多酚以及甾體等具有強(qiáng)活性的物質(zhì)。這些具有生物活性的物質(zhì)對(duì)降血糖、降血脂、肝病、抗菌治療以及抗癌治療有顯著的效果。但是由于其子實(shí)體較稀少、價(jià)格昂貴、人工培養(yǎng)

2、不成熟，因此，利用液體深層發(fā)酵獲得樺褐孔菌的生物活性物質(zhì)具有重要的意義。
　　經(jīng)研究表明，促進(jìn)劑能有效地促進(jìn)細(xì)胞膜的通透性，從而影響真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成。本論文研究的目的是探索三類(lèi)18種促進(jìn)劑對(duì)樺褐孔菌胞內(nèi)外多酚的影響，篩選出最佳促進(jìn)劑，同時(shí)探索其對(duì)多酚抗氧化活性的影響以及多酚組分的影響。此外，繼續(xù)我們課題組木質(zhì)纖維素的研究，探究表面活性劑與木質(zhì)纖維素之間的作用對(duì)樺褐孔菌胞內(nèi)外多酚產(chǎn)量的影響。
　　結(jié)果表明:
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3、.亞油酸與吐溫20為樺褐孔菌發(fā)酵多酚的最佳促進(jìn)劑，其中胞內(nèi)外多酚分別為202.20mg/L、726.47mg/L、31.78mg/g和103.74mg/L、307.99mg/L、9.28mg/g,分別是空白對(duì)照組的7.5倍、14.5倍、9.9倍和3.8倍、6.1倍、2.9倍。18種促進(jìn)劑中葵花油、油酸、吐溫80、吐溫20對(duì)菌絲體量生長(zhǎng)的促進(jìn)作用最顯著，分別達(dá)到12.67g/L、12.65g/L、12.05g/L、12.04g/L，分別提

4、高了12.4％、12.2％、6.9％、6.8％。
　　2.測(cè)定不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)所得到的胞內(nèi)外多酚的DPPH自由基清除率從而鑒定其抗氧化活性。18種促進(jìn)劑中丙酮對(duì)胞內(nèi)多酚DPPH自由基清除率最強(qiáng)，是空白的3倍;吐溫20對(duì)胞外兩層多酚的清除率最強(qiáng)，分別達(dá)到80.52％、84.51％，亞油酸次之。
　　3.測(cè)定添加亞油酸與吐溫20培養(yǎng)基所得的胞內(nèi)外多酚的IC50值IC50值要遠(yuǎn)低于空白對(duì)照組，其中添加吐溫20的要低于添加亞油酸的，

5、同時(shí)驗(yàn)證了添加吐溫20后發(fā)酵所得的胞內(nèi)外多酚的DPPH自由基清除率要強(qiáng)于亞油酸培養(yǎng)基。
　　4.相較于對(duì)照培養(yǎng)基，添加亞油酸與吐溫20培養(yǎng)基的多酚組分中具有較強(qiáng)活性的多酚類(lèi)物質(zhì)如ECG、EGCG、phelligridin G、桑黃素B以及骨碎補(bǔ)內(nèi)酯的含量較高。其中，添加亞油酸培養(yǎng)基提取的EGCG、phelligridin G的產(chǎn)量分別達(dá)到232.09mg/g、317.23mg/g、204.75mg/g和28.14mg/g、12.8

6、2mg/g、204.75mg/g,高于吐溫20培養(yǎng)基中的提取物。而ECG、桑黃素B、以及骨碎補(bǔ)內(nèi)酯在吐溫20的培養(yǎng)基中的含量要高于亞油酸培養(yǎng)基的提取物，含量分別達(dá)到287.68mg/g、333.45mg/g、184.47mg/g,17.78mg/g、13.16mg/g、14.49mg/g和26.72mg/g、12.99mg/g、35.67mg/g。
　　5.亞油酸與吐溫20的最佳添加濃度和添加時(shí)間均是1g/L、第0天。用乙酸乙酯與

7、正丁醇萃取得到胞外多酚，用丙酮提取胞內(nèi)多酚。所測(cè)得的胞外多酚產(chǎn)量分別為202.20mg/L、726.47mg/L和103.74mg/L、307.99mg/L，分別是空白對(duì)照組的7.5倍、14.5倍和3.8倍、6.1倍。胞內(nèi)多酚產(chǎn)量為31.78mg/g、9.28mg/g，分別是空白對(duì)照組的9.9倍、2.9倍。
　　6.在培養(yǎng)基中添加麥稈與5種表面活性劑，探索木質(zhì)纖維素與表面活性劑的混合對(duì)樺褐孔菌生物量與胞內(nèi)外多酚的影響。采用同樣測(cè)定