催化生物柴油生產(chǎn)的脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及其相關(guān)基因的研究.pdf

1、脂肪酶是在生物化工中很重要的酶類，近年來(lái)更被廣泛的應(yīng)用于生物柴油的研究中。酶法生產(chǎn)生物柴油一般采用成品酶，價(jià)格較高。從土壤中篩選產(chǎn)脂肪酶菌就可以得到廉價(jià)的脂肪酶，降低生物柴油成本，使之廣泛應(yīng)用。 在釀酒廠、糧店、加油站、面粉廠等可能產(chǎn)生特異菌株的地點(diǎn)附近，采集土樣20份，用含有橄欖油為唯一碳源的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基中，繼代5次，用以橄欖油PVA乳化液為底物的篩選培養(yǎng)基篩選出一株脂肪酶活力相對(duì)較高的菌株22號(hào)菌，經(jīng)過(guò)菌落形態(tài)觀察和擴(kuò)增其16

2、S rRNA的初步鑒定，為細(xì)菌Aranicola sp．屬。 以脂肪酶活力較穩(wěn)定的6號(hào)菌為出發(fā)菌株，進(jìn)行脂肪酶相關(guān)基因的研究，為構(gòu)建基因工程菌株打下基礎(chǔ)。提取基因組DNA，用限制性內(nèi)切酶酶切成1～3 kb的DNA片段，與去磷酸化的pUC18質(zhì)粒進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α，得到約2萬(wàn)個(gè)左右擬陽(yáng)性克隆，目前擬陽(yáng)性克隆的篩選正在進(jìn)行中。 觀察極性溶劑對(duì)脂肪酶活力的影響。在產(chǎn)酶培養(yǎng)基中分別加入不同劑量的甲醇、乙醚和