TMPyP4-PDT對(duì)人宮頸癌hela、siha細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及對(duì)其C-myc、hTERC表達(dá)影響的研究.pdf

1、宮頸癌是女性常見(jiàn)腫瘤之一，其發(fā)病率及死亡率均居女性腫瘤的前位。目前手術(shù)、化療、放療仍是宮頸癌的傳統(tǒng)治療方法。光動(dòng)力治療(photodynamictherapyPDT)是近年來(lái)快速發(fā)展起來(lái)的一種治療腫瘤的新的輔助手段，其主要原理是利用內(nèi)源性或外源性的光敏劑選擇性的吸收并潴留于病變組織中，然后在特定波長(zhǎng)的激光照射下激活光敏劑，產(chǎn)生大量具有細(xì)胞毒性的活性氧(ROS)，從而達(dá)到使細(xì)胞或者組織死亡的目的。c-myc基因及人類染色體端粒RNA(hT

2、ERC)基因的過(guò)度表達(dá)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用。大量研究均證實(shí)宮頸癌及其癌前病變中均存在c-myc及hTERC基因的擴(kuò)增或過(guò)度表達(dá)?？纱龠M(jìn)誘導(dǎo)并穩(wěn)定G-四聯(lián)體形成的四甲基吡啶卟啉(5，10，15，20-tetra-(N-methyl-4-pyridyl)porphyrin，TMPyP4)是一種新型的水溶性光敏劑，屬于人工合成的四價(jià)陽(yáng)離子卟啉化合物，并有報(bào)道其可抑制端粒酶的活性[1]。本研究將探討端粒酶抑制劑四甲基吡啶卟啉(TMP

3、yP4)作為光敏劑介導(dǎo)的光動(dòng)力治療對(duì)體外培養(yǎng)的人宮頸癌hela及siha細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。并篩選出較為敏感的細(xì)胞。并觀察TMPyP4-PDT對(duì)篩選出細(xì)胞c-myc、hTERC基因表達(dá)的影響，初步探討其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制。
　　 第一部分TMPyP4-PDT對(duì)宮頸癌hela、siha細(xì)胞殺傷效應(yīng)的研究
　　 目的:探討TMPyP4-PDT對(duì)體外培養(yǎng)的宮頸癌hela、siha細(xì)胞的殺傷作用。
　　 方法:選擇人宮頸癌hel

4、a、siha細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，分為正常對(duì)照組（不加光敏劑也不照光）;單純TMPyP4組（加光敏劑不照光）;單純光照組（不加光敏劑，照光）;實(shí)驗(yàn)組（即加光敏劑又照光）。CCK-8法檢測(cè)TMPyP4-PDT對(duì)人宮頸癌細(xì)胞hela、siha的抑制作用;
　　 結(jié)果:正常對(duì)照組，單純TMPyP4組及單純光照組對(duì)hela、siha細(xì)胞的增殖均無(wú)明顯影響。TMPyP4-PDT組中，在同一藥物濃度下，隨著光照能量的加強(qiáng)，細(xì)胞的抑制率逐漸

5、增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同一激光能量組，當(dāng)TMPyP4濃度在0-50μmol/L時(shí)，抑制率隨著藥物濃度的增加而呈上升趨勢(shì)，各濃度之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);當(dāng)TMPyP4濃度在50-100μmol/L時(shí)，抑制率差異不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在相同激光劑量和TMPyP4濃度作用下，對(duì)hela細(xì)胞的抑制率高于對(duì)siha細(xì)胞的抑制率(P＜0.05)。在本實(shí)驗(yàn)中，光敏劑TMPyP4濃度為50μmol/L，

6、激光劑量8J/cm2是TMPyP4-PDT體外殺傷hela、siha細(xì)胞較為理想的條件。在此條件下，hela、siha細(xì)胞的IC50分別是8.158、14.693μmol/L，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:TMPyP4-PDT對(duì)宮頸癌hela、siha細(xì)胞均有顯著殺傷作用，該作用存在光敏劑濃度及能量依賴現(xiàn)象，并有飽和現(xiàn)象;宮頸癌hela、siha細(xì)胞對(duì)TMPyP4-PDT的敏感性不同，宮頸癌hela細(xì)胞較敏感

7、。
　　 第二部分TMPyP4-PDT對(duì)宮頸癌hela細(xì)胞c-myc、hTERC表達(dá)的影響
　　 目的:探討TMPyP4-PDT對(duì)宮頸癌hela細(xì)胞的抑制作用及對(duì)c-myc、hTERC表達(dá)的影響。
　　 方法:選取激光劑量為4J/cm2。光鏡下觀察不同光敏劑濃度下細(xì)胞形態(tài)的變化;Annexin-V-FITC/PI雙染試劑盒檢測(cè)不同光敏劑濃度下細(xì)胞凋亡率;選取光敏劑濃度為20μmol/L,RT-PCR法測(cè)定宮頸癌細(xì)

8、胞hela正常對(duì)照組及TMPyP4-PDT組干預(yù)6、12、24、48、72小時(shí)后原癌基因c-myc、人類染色體端粒酶基因hTERC的變化。
　　 結(jié)果:光鏡下可觀察到隨著光敏劑濃度的增加，細(xì)胞逐步出現(xiàn)壞死和凋亡樣改變。Annexin-V-FITC/PI雙染試劑盒檢測(cè)細(xì)胞隨著隨著TMPyP4濃度的增加，細(xì)胞的凋亡率及壞死率均增加。RT-PCR法測(cè)定隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)c-mycmRNA、hTERCmRNA的表達(dá)降低。