微RNA-375通過抑制YAP基因表達(dá)調(diào)控CIK細(xì)胞對宮頸癌SiHa細(xì)胞的體外殺傷效應(yīng).pdf

1、目的：探討微 RNA-375（microRNA-375，miR-375）參與細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷（cytokine-induced killer，CIK）細(xì)胞殺傷宮頸癌SiHa細(xì)胞過程的調(diào)控作用，并確定miR-375發(fā)揮功能的靶基因及其分子機(jī)制。
　　方法：分離健康者外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，在體外用多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)14d后獲得CIK細(xì)胞。收集CIK細(xì)胞用作效應(yīng)細(xì)胞，F(xiàn)CM法分析其免疫表型，并采用CCK-8法測定CIK細(xì)胞對宮頸癌Si

2、Ha細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測CIK細(xì)胞共培養(yǎng)前后宮頸癌SiHa細(xì)胞中miR-375的表達(dá)水平。CCK-8法檢測miR-375模擬物轉(zhuǎn)染后SiHa細(xì)胞的活性變化，以及CIK細(xì)胞共培養(yǎng)對轉(zhuǎn)染miR-375抑制子后SiHa細(xì)胞的生長抑制作用。細(xì)胞免疫熒光法和蛋白質(zhì)印跡法檢測與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)染miR-375抑制子的SiHa細(xì)胞中Yes相關(guān)蛋白（Yes-associated protein，YAP）的表達(dá)情況。
　　

3、結(jié)果：與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)24、48和72h后，SiHa細(xì)胞的生長抑制率分別為（22.97±3.54）％、（37.48±3.64）%和（54.32±4.25）%，SiHa細(xì)胞中miR-375的相對表達(dá)量分別約為共培養(yǎng)前的1.39、1.57和2.68倍。轉(zhuǎn)染miR-375模擬物后，SiHa細(xì)胞的活性顯著降低（P＜0.001）。轉(zhuǎn)染miR-375抑制子后，CIK細(xì)胞抑制SiHa細(xì)胞生長的效應(yīng)顯著降低（P＜0.001）。YAP蛋白在SiHa細(xì)胞

4、中大量表達(dá)，且主要集中于細(xì)胞核。與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)染miR-375抑制子的SiHa細(xì)胞中YAP蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.CIK細(xì)胞對宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖具有抑制作用，且在一定的時(shí)間范圍內(nèi)隨著作用時(shí)間的延長，細(xì)胞抑制作用顯著增強(qiáng)；
　　2.miR-375可能在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展中起到抑瘤作用；
　　3.CIK細(xì)胞可上調(diào)宮頸癌SiHa細(xì)胞中miR-375的表達(dá)水平，miR-37