hTERT、Bcl-2在宮頸鱗癌中的表達(dá)及冬凌草甲素抑制人宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖作用研究.pdf

1、目的：探討hTERT及Bcl-2在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義；研究冬凌草甲素(Oridonin，Ori)對(duì)人宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖的抑制作用及其機(jī)制。 方法：應(yīng)用免疫組化SABC法檢測hTERT及Bcl-2在89例宮頸鱗癌及20例正常宮頸組織中的表達(dá)。采用MTT法測定Ori對(duì)Siha細(xì)胞增殖的抑制作用；Wright-Giemasa染色、Hoechst33258熒光染色、透射電鏡觀察Ori處理SiHa細(xì)胞后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；采用

2、流式細(xì)胞儀檢測Ori對(duì)SiHa細(xì)胞凋亡的影響：應(yīng)用RT-PCR檢測Ori處理后SiHa細(xì)胞中hTERT、Bcl-2及e-myc mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：在正常宮頸組織和宮頸鱗癌組織中，hTERT表達(dá)的陽性率分別為20.0％、76.4％，差異顯著(P<0.01)；Bcl-2的表達(dá)陽性率分別為35.0％、79.8％，有顯著性差異(P<0.01)；且在宮頸鱗癌組織中hTERT的陽性表達(dá)與Bcl-2的陽性表達(dá)呈正相關(guān)性(P<0.01，r

3、=0.332)。MTT法檢測顯示Ori能顯著抑制SiHa細(xì)胞的生長，且具有濃度和時(shí)間依賴趨勢。流式細(xì)胞儀檢測顯示，15μM Ori作用SiHa細(xì)胞48 h后，其凋亡率為14.0％，并使細(xì)胞周期阻滯在S期，30μM Ori組凋亡率較15μM組下降。Wright-Giemasa和Hoechst染色可見SiHa細(xì)胞變圓，胞漿減少，核染色質(zhì)邊集。電鏡可見SiHa細(xì)胞線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊泡狀擴(kuò)張，核染色質(zhì)邊集、濃縮，細(xì)胞膜完整且邊界清楚，部分細(xì)胞

4、壞死成碎片狀。RT-PCR分析顯示隨著Ori濃度的增加，hTERT、Bcl-2及c-myc mRNA的表達(dá)均呈下降趨勢。 結(jié)論：hTERT、Bcl-2蛋白在宮頸鱗癌組織中陽性表達(dá)率顯著高于正常宮頸組織，二者共同參與并協(xié)同促進(jìn)宮頸鱗癌的發(fā)生與發(fā)展。hTERT隨著宮頸鱗癌惡性級(jí)別增加呈升高表達(dá)的特性，使其有望成為判斷宮頸鱗癌惡性程度的參考指標(biāo)之一。Ori能顯著抑制SiHa細(xì)胞增殖，低劑量可誘導(dǎo)SiHa細(xì)胞凋亡，高劑量可誘導(dǎo)SiHa細(xì)