鼻咽癌中STGC3相關(guān)蛋白質(zhì)ANXA3與NNMT的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：課題組前期采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，從敲低STGC3基因表達(dá)的人鼻咽永生化上皮細(xì)胞NP69，篩選鑒定出83個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)分子，本研究從中挑選高表達(dá)蛋白質(zhì)膜粘蛋白3(annexin A3 ANXA3)及低表達(dá)蛋白質(zhì)尼克酰胺轉(zhuǎn)移酶(nicotinamide N-methyltransferase NNMT)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，并分析 ANXA3和NNMT蛋白質(zhì)在鼻咽癌細(xì)胞及組織中表達(dá)的意義，探討ANXA3和NNMT表達(dá)與STGC3基因的關(guān)系，

2、為闡明 STGC3基因在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用RT-PCR和Western-blot技術(shù)，檢測(cè)ANXA3和NNMT在敲低STGC3表達(dá)的NP69細(xì)胞系、鼻咽癌CNE1和CNE2細(xì)胞系及鼻咽癌組織中的表達(dá)；免疫組織化學(xué)染色，檢測(cè)ANXA3和NNMT在鼻咽癌組織中的表達(dá)，分析ANXA3和NNMT表達(dá)與STGC3的關(guān)系及意義。
　　結(jié)果：
　　RT-PCR結(jié)果顯示：在 STGC3低表達(dá)的NP69

3、細(xì)胞（PRNAT-U6/shRNA-STGC3-NP69）、鼻咽癌CNE1及CNE2細(xì)胞、鼻咽癌組織均存在ANXA3基因mRNA表達(dá)水平增高，分別與細(xì)胞對(duì)照組(NP69細(xì)胞)和組織對(duì)照組（非鼻咽癌組織）比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；而NNMT基因的表達(dá)降低，與對(duì)照組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；灰度掃描，計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，ANXA3基因：NP69細(xì)胞0.366±0.036、STGC3低表達(dá) NP69細(xì)胞0.727±0.

4、031、CNE1細(xì)胞0.737±0.051、CNE2細(xì)胞0.754±0.031、非鼻咽癌組0.358±0.015、鼻咽癌組0.667±0.031；NNMT基因：NP69細(xì)胞0.670±0.022、STGC3低表達(dá)NP69細(xì)胞0.362±0.055、CNE1細(xì)胞0.335±0.026、CNE2細(xì)胞0.375±0.042、非鼻咽癌組0.783±0.090、鼻咽癌組0.329±0.054。
　　Western-blot結(jié)果與RT-PCR

5、檢測(cè)結(jié)果一致：低表達(dá)STGC3的NP69細(xì)胞、鼻咽癌CNE1及CNE2細(xì)胞、鼻咽癌組織均存在ANXA3蛋白表達(dá)高表達(dá)，與對(duì)照組間差異具有顯著意義(P<0.05)；而各實(shí)驗(yàn)組均顯示NNMT蛋白表達(dá)降低，與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；經(jīng)灰度掃描，計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，ANXA3蛋白：NP69細(xì)胞0.530±0.050、STGC3低表達(dá)NP69細(xì)胞0.916±0.025、CNE1細(xì)胞0.856±0.038、CNE2細(xì)胞0.928±

6、0.043、非鼻咽癌組織0.560±0.006、鼻咽癌組織0.933±0.031，NNMT蛋白：NP69細(xì)胞0.994±0.049、STGC3低表達(dá)NP69細(xì)胞0.696±0.030、CNE1細(xì)胞0.759±0.027、CNE2細(xì)胞0.742±0.024、非鼻咽癌組織0.868±0.041、和鼻咽癌組織0.582±0.093。
　　免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：ANXA3蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜， NNMT蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞漿和細(xì)

7、胞核，以細(xì)胞漿為主，鼻咽癌組織和對(duì)照組非鼻咽癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率分別為：ANXA3蛋白83.3％(鼻咽癌10/12)和23.1%(對(duì)照組3/13)，NNMT蛋白41.6%(鼻咽癌5/12)和84.6%(對(duì)照組11/13)；鼻咽癌組織中ANXA3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于組，而NNMT蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率則低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. ANXA3在敲低 STGC3低表達(dá)的人鼻咽上皮 NP69細(xì)胞中