復方葡萄籽膠囊抗實驗性黃褐斑作用及功效成分測定研究.pdf

1、目的:
　　通過研究復方葡萄籽膠囊對實驗性黃褐斑小鼠體內(nèi)SOD、MDA、GSH-PX活力的影響，探討復方葡萄籽膠囊抗氧化作用機制，優(yōu)選最佳配方比;同時測定復方葡萄籽膠囊中丹參素與原花青素的含量。為進一步研制開發(fā)成為防治黃褐斑的新型保健食品提供實驗數(shù)據(jù)，亦為今后質(zhì)量標準制定提供依據(jù)。
　　方法:
　　1、雌性昆明種小鼠50只，隨機分為空白組、模型組、復方葡萄籽膠囊高、中、低劑量組，共5組，每組10只。給藥組分別用195、

2、130和65 mg/kg復方葡萄籽膠囊灌胃，空白組與模型組按體重用一定體積雙蒸水灌胃;模型組與給藥組同時用10mg·kg-1黃體酮注射大腿根部，每日1次，每周6次，兩側(cè)交替;背部脫毛(面積為1.5 cm×1.5 cm)，置光毒儀中于320 nm波長紫外線下照射20 min，每日1次，每周6次。30d后取肝臟，制備血清和肝勻漿，測定小鼠血清肝臟各指標。
　　2、通過高效液相色譜法(HPLC)測定丹參素含量。膠囊內(nèi)容物精密加入50％甲

3、醇25 mL超聲處理30 min放冷后稱定質(zhì)量，并用50％甲醇補足減失的重量。以甲醇-1％冰醋酸(5∶95)為流動相等度洗脫色譜柱為Eclipse Plus C18(4.6×250 mm，5μm)色譜柱，;流速為1.0 mL·min-1，進樣量為10μL;柱溫30℃;檢測器為二極管陣列檢測器，波長281 nm。理論板數(shù)按丹參素鈉峰計應不低于4000。
　　3、鐵鹽催化比色法測定原花青素含量。精確稱取樣品1.000 g左右于100

4、mL容量瓶中，加入適量甲醇，超聲處理10 min，定容，離心備用。精密吸取樣品待測液1 mL于10 mL具塞試管中，加入0.2 mL2％NH4Fe(SO4)2.12H2O溶液和6mL酸性正丁醇溶液。95℃的水浴中加熱反應40 min，取出，于冰水中迅速冷卻，溶液顯紅色，以空白管作對照，紫外可見分光光度計550 nm處測定其吸光度。由標準曲線回歸方程算出含量，按其稀釋倍數(shù)求得樣品中原花青素總含量。
　　結(jié)果:
　　1、小鼠黃褐

5、斑模型血清中SOD、GSH-PX活性明顯降低、MDA增加，低、中、高三個劑量組分別給藥后，與模型對照組相比，給藥組均表現(xiàn)出明顯改善作用，中、高劑量組與模型組比較有顯著性(p＜0.05），并具有劑量依賴性，同時中、高劑量組復方葡萄籽膠囊可以明顯升高小鼠肝臟的SOD活力，降低MDA水平(p均＜0.05）。
　　2、HPLC法測定丹參素含量結(jié)果:含量測定在11.3μg/mL-226μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為y=7.351x

6、-18.88(r=0.9954)，平均回收率為99.77％，RSD=0.92％(n=6)。樣品平均含量為4.2139 mg/g，三批樣品中含量相對標準偏差RSD=0.4652％。
　　3、鐵鹽催化比色法測定原花青素含量結(jié)果:含量測定在47.5μg/mL-984.8μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最小二乘法計算得到原花青素濃度-吸光度線性方程為y=0.001x+0.023(r=0.9992)，平均回收率為99.06％(n=9)。樣品平

7、均含量6.3958 g/100 g。顯色30 min內(nèi)含量測定無差異，三批樣品測定含量相對標準偏差RSD=1.4409％。
　　結(jié)論:
　　復方葡萄籽膠囊各三劑量組可以明顯提高小鼠血和肝臟中SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，表明復方葡萄籽膠囊膠囊具有良好的抗氧化作用，對黃體酮與紫外線誘導的小鼠黃褐斑模型具有良好的防治作用。同時表明黃褐斑的發(fā)病原因是多方面的，與體內(nèi)抗氧化失衡與外界紫外線刺激均有聯(lián)系。
　　含量測