京尼平苷對鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的AD動物模型學(xué)習(xí)記憶行為的保護(hù)作用，tau蛋白過磷酸化的緩解作用，抗凋亡作用及GSK3調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、雖然已經(jīng)有五種FDA認(rèn)證的藥物（tacrine,rivastigmine,galantamine,donepezil,andmemantine）可以有效的延緩Alzheimer?。ˋD）的發(fā)病進(jìn)程，但是至今依然缺乏對AD這種中樞神經(jīng)退行性疾病有效的治療策略。目前認(rèn)為，有效阻止AD的方法是依賴于早期的診斷和預(yù)防。對于中藥治療AD的研究不失為一種AD的早期預(yù)防與治療有效策略。
　　AD與2型糖尿?。═2DM）之間的密切關(guān)系目前已經(jīng)得到

2、了廣泛的證實(shí)?；趦烧叩墓餐l(fā)病機(jī)制，糖尿病治療藥物或許可以發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。通過激活GLP-1受體，GLP-1類似物已經(jīng)成為了一種臨床上成熟的糖尿病治療新藥。同時(shí)，在動物實(shí)驗(yàn)中，GLP-1類似物則被證實(shí)具有對AD動物模型的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。
　　本實(shí)驗(yàn)所采用的中藥單體京尼平苷（Geniposide）已被證明是一種GLP-1受體激動劑，同時(shí)在培養(yǎng)細(xì)胞水平已經(jīng)被證實(shí)具有神經(jīng)保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)旨在從AD動物模型的水平證實(shí)京尼平苷的神經(jīng)保護(hù)效

3、應(yīng)。采用鏈脲佐菌素（STZ）側(cè)腦室注射形成AD大鼠模型。通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)我們證實(shí)了單次側(cè)腦室注射京尼平苷（50μM,10μl）有效的阻止了約40％的STZ誘導(dǎo)的空間認(rèn)知損傷和約30%的STZ誘導(dǎo)的tau蛋白的過度磷酸化。與我們的預(yù)期相反，在免疫組化試驗(yàn)中，我們并沒有在STZ誘導(dǎo)的大鼠腦內(nèi)觀察到AD的另一重要病理變化β-淀粉樣蛋白（Aβ）的聚集，同時(shí)westernblot測定也顯示Aβ的前體蛋白——淀粉樣前體蛋

4、白（APP）在STZ大鼠腦內(nèi)的表達(dá)也沒有明顯升高。在治療組的基礎(chǔ)上，我們利用PI3K的特異性抑制劑wortmannin（WT）阻止PI3K活性從而引起其下游蛋白GSK3的去抑制，以此干預(yù)治療組從而探究PI3K/GSK3信號通路在京尼平苷神經(jīng)保護(hù)作用中扮演的角色。結(jié)果顯示，WT一定程度上阻止了京尼平苷對STZ誘導(dǎo)的大鼠行為學(xué)保護(hù)作用以及tau蛋白過度磷酸化的緩解作用，這一結(jié)果證實(shí)了PI3K/GSK3在京尼平苷的神經(jīng)保護(hù)作用中扮演著關(guān)鍵角色

5、。
　　GSK3是一種重要的參與tau蛋白磷酸化調(diào)節(jié)的激酶。GSK3的過度活化在AD的多種病理變化有著廣泛的相關(guān)性。通過westernblot實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)STZ側(cè)腦室注射引發(fā)了腦內(nèi)顳葉皮層GSK3β的過度活化。同時(shí)，京尼平苷通過對GSK3β兩個(gè)調(diào)控位點(diǎn)的調(diào)節(jié)——上調(diào)抑制位點(diǎn)Ser9的磷酸化，下調(diào)激活位點(diǎn)Tyr216的磷酸化——抑制了STZ誘導(dǎo)的GSK3β的過度活化。
　　最后，我們通過透射電鏡進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察并發(fā)現(xiàn)京尼平苷