云芝Cov-1菌株原生質(zhì)體誘變育種、發(fā)酵工藝條件優(yōu)化及其復(fù)方制劑——芝參正肝提取工藝的研究.pdf

1、云芝［Corilus versicolor(L.er.Fr.)Qu’ei.]是一種世界性分布的藥用真菌。云芝多糖肽具有明顯的抗腫瘤、改善免疫功能、降血壓、抗炎等功效。中醫(yī)認(rèn)為云芝具有扶正固本、補(bǔ)益精氣的作用。本論文對云芝Cov-1菌株的選育、發(fā)酵條件的優(yōu)化等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，同時(shí)對云芝糖肽的復(fù)方制劑-芝參正肝膠囊的提取工藝進(jìn)行了研究。 1.研究了酶種類、酶濃度、酶解溫度和時(shí)間、滲透壓穩(wěn)定劑、pH值及菌齡等因素對云芝原生質(zhì)體制備

2、以及不同再生培養(yǎng)基對云芝原生質(zhì)體再生的影響。結(jié)果表明，菌齡3 d的云芝菌絲體用3％溶壁酶，以pH 5.5、0.4 mol/L的KCI為穩(wěn)定劑，30℃酶解5 h獲得的原生質(zhì)體產(chǎn)量最高；用RM1再生培養(yǎng)基培養(yǎng)，原生質(zhì)體再生率最高。 2.采用云芝原生質(zhì)體紫外誘變方法，從出發(fā)菌株篩選出一株遺傳上相對穩(wěn)定的適應(yīng)液體培養(yǎng)的云芝誘變菌株——YBUV113，該菌株在綜合PDA斜面上生長速度較快，長勢旺盛。在液體培養(yǎng)基中發(fā)酵生長迅速，菌絲濕重、干

3、重和多糖產(chǎn)量均與出發(fā)菌株相當(dāng)。 3.碳、氮源是影響液體培養(yǎng)云芝菌絲體生長的重要因素。其中，玉米粉是其適合碳源，黃豆餅粉為其適合氮源。實(shí)驗(yàn)確定了云芝深層培養(yǎng)的較適合的培養(yǎng)基組成為：玉米粉2％，黃豆餅粉2％，KH2PO40.3％，K2HP040.3％。最佳搖瓶培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基起始pH5.5，接種量20％，搖床轉(zhuǎn)速180r/min，培養(yǎng)3天。在上述條件下，每升發(fā)酵液可獲得干菌絲體34.5g/L。糖含量53.74％，蛋白含量18.36

4、％。 4.芝參正肝是云芝糖肽的復(fù)方制劑，由云芝糖肽、丹參、三七、赤芍、葛根、銀杏葉6味中藥組成的現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑。本文對芝參正肝提取純化工藝進(jìn)行了研究，通過提取方法的比較和正交試驗(yàn)確定了芝參正肝提取方法及其優(yōu)化工藝條件。結(jié)果，滲漉提取最佳工藝條件為：藥材粉碎成粗粉，用14倍藥材重量的70％億醇滲漉，滲漉速度為1mL/min；大孔樹脂純化最佳工藝條件為：上柱提取液濃度為200mg/mL，上柱流速3Bv/h，洗脫時(shí)采用60％乙醇，體