云芝Cov-Ⅰ菌株的誘變育種、提取工藝及發(fā)酵條件的探究.pdf

1、云芝糖肽是從液體發(fā)酵的云芝[Coriolus versicolor(L.er.Fr)Qu'ei.]Cov-I菌絲體中水提醇沉得到的一種多糖肽，具有抗腫瘤和提高機體免疫功能的顯著效果，并已批準(zhǔn)作為腫瘤輔助治療藥物。采用液體發(fā)酵和水提醇沉工藝生產(chǎn)的云芝糖肽存在著得率低、成本高的技術(shù)瓶頸。為提高生產(chǎn)效率、降低成本、增加收益，本論文從云芝誘變育種、發(fā)酵工藝和提取工藝優(yōu)化三個方面來尋找突破技術(shù)瓶頸的方法。
　　 本文以云芝Cov-I菌株為

2、出發(fā)菌株制備云芝原生質(zhì)體，采用紫外誘變進(jìn)行原生質(zhì)體誘變育種，并結(jié)合溶壁酶的耐受能力進(jìn)行篩選。從誘變得到的301株菌中篩選到1株遺傳性質(zhì)較穩(wěn)定、適合液體培養(yǎng)的云芝誘變菌株——YUBV93。該菌在PDA斜面上生長速度較快，菌絲茂密，經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)得到的菌絲體干重、粗多糖肽得率及產(chǎn)品中總多糖含量均略高于出發(fā)菌株。
　　 通過對云芝中糖肽類物質(zhì)提取工藝的研究，確定了提取云芝胞內(nèi)糖肽類物質(zhì)的優(yōu)化工藝條件，并對提取的糖肽類物質(zhì)進(jìn)行了糖和蛋白

3、質(zhì)的定量分析。結(jié)果，水提法獲取的云芝糖肽得率為4.9％，總糖含量為36.8％、蛋白含量為26.5％；堿提法獲取的云芝胞內(nèi)糖肽得率為10.4％，總糖含量為39.0％、蛋白含量為28.0％；冷堿提殘渣獲取的云芝胞內(nèi)糖肽得率為3.6％，總糖含量為37.3％、蛋白含量為27.0％；熱堿提殘渣獲取的云芝胞內(nèi)糖肽得率為3.8％，總糖含量為38.2％、蛋白含量為27.8％；云芝胞外糖肽的得率為1.15％，總糖含量為50.2％、蛋白含量為30.5％。提

4、取云芝胞內(nèi)糖肽類物質(zhì)的優(yōu)化條件為：先用傳統(tǒng)的水提醇沉法提取水溶性糖肽類物質(zhì)，再依次用25℃冷堿和90℃熱堿各提取菌絲體殘渣2次以獲取堿溶性糖肽類物質(zhì)。
　　 對云芝菌絲體發(fā)酵工藝的研究發(fā)現(xiàn)，Mg2+、Ca2+、EDTA、甘油和植物油對云芝菌絲體及其糖肽產(chǎn)量都有促進(jìn)作用。通過單因素比較研究確定了Mg2+、Ca2+、EDTA、甘油和植物油的最適添加量分別為0.3％、0.3％、0.0002％、3％和7％，此條件下每150mL發(fā)酵液中干

5、菌絲體的產(chǎn)量分別為1.52g、1.41g、1.40g、1.69g、2.25g，比原培養(yǎng)基的產(chǎn)量分別提高了26％、17％、18％、37％和87％，而菌絲體中云芝糖肽的提取率及其總糖含量則無明顯改變，分別為4.93％、4.87％、4.92％、4.97％、4.99％和36.97％、37.02％、36.85％、36.84％、36.90％。
　　 以YUBV93為出發(fā)菌株，發(fā)酵培養(yǎng)基中添加7％的植物油和0.3％的MgCl2并采用優(yōu)化的提取