蚯蚓組織提取物的抗菌、抗腫瘤及免疫增強活性研究.pdf

1、蚯蚓又稱地龍，廣泛分布于我國各地。作為藥用具有清熱平肝、消炎止痛、活血化淤及主治高熱狂燥等功效，可治療20多種疾病，是我國寶貴的中藥材之一。近年來人們對蚯蚓體內(nèi)多種生物活性物質進行了研究，比如抗菌肽，但從抗菌、抗腫瘤和免疫增強活性三個方面同時進行研究還未見報道。 目的：從蚯蚓中分離出具有生物活性的物質，然后對其進行抗菌、免疫增強和抗腫瘤實驗，并研究其作用機理，為以后研究開發(fā)抗菌和抗腫瘤藥物提供依據(jù)。 方法：采用丙酮分步沉

2、淀法制備蚯蚓組織提取物，對提取物進行SDS-PAGE凝膠電泳和Tricine-甘油SDS-PAGE凝膠電泳，以估計其分子量。然后采用平板打孔法對其進行抗菌試驗。對抗菌活性強的粗提物采用微量平板法測定最小抑菌濃度(MIC)。選取抗菌活性強的粗提物進行葡聚糖G-15粗分離，收集分子量小的主要成分，即為粗分離蚯蚓組織提取物。對粗分離提取物進行高效液相色譜分析，判斷其純度。采用MTT法測定粗分離提取物對小鼠脾淋巴細胞的增殖作用和體外對S-180

3、肉瘤細胞的抑制作用。建立小鼠S-180腫瘤模型，按給藥劑量不同分組。將昆明種小鼠60只，隨機分為六組，每組10只：(1)未接種腫瘤組，動物不接種腫瘤，以生理鹽水灌胃，0.2 mL/只/天；(2)S-180腫瘤模型組，接種腫瘤，以生理鹽水灌胃，0.2 mL/只/天；(3)粗分離提取物I組，接種腫瘤，以100 mg/kg的粗分離提取物灌胃，0.2 mL/只/天；(4)粗分離提取物II組，接種腫瘤，以300 mg/kg的粗分離提取物灌胃，0.

4、2 mL/只/天；(5)粗分離提取物III組，接種腫瘤，以500 mg/kg的粗分離提取物灌胃，0.2 ml/只/天；(6)S-180陽性對照組，接種腫瘤，每只以復方環(huán)磷酰胺20 mg/kg/d灌胃給藥。研究粗分離提取物體內(nèi)抗腫瘤的機理及其對吞噬細胞吞噬能力的影響，測定小鼠抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，并與抗癌藥環(huán)磷酰胺相比較。 結果：從蚯蚓中分離得到三種蚯蚓組織提取物，其中9倍丙酮蚯蚓組織提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和變形桿菌

5、的抑菌活性最強，抑菌圈直徑分別為1.7 cm、1.3 cm和1.5 cm，對大腸桿菌的MIC為：25 mg/mL，對金黃葡萄球菌和變形桿菌的MIC均為50 mg/mL。對9倍丙酮蚯蚓組織提取物粗分離得到的粗分離提取物分子量較小，分子量范圍為3313Da-7823Da。粗分離提取物對小鼠脾淋巴細胞有較強的增殖作用，對S-180肉瘤細胞體內(nèi)體外均有抑制作用，能提高荷S-180肉瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，提高小鼠吞噬細胞吞噬能力，對小鼠免疫能力