乳酸菌發(fā)酵麥胚提取物抗腫瘤活性研究.pdf

1、惡性腫瘤疾病已成為人類的主要死因之一，發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升的趨勢。目前治療腫瘤的化學合成藥物均有一定的副作用，因此發(fā)掘安全、有效的食源性抗腫瘤天然產(chǎn)物具有重要意義。小麥胚芽（簡稱麥胚）是小麥加工過程的副產(chǎn)物，富含多種生物活性成分，而通過微生物轉(zhuǎn)化制備的發(fā)酵麥胚提取物具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤等多種功效。因此，可采用生物轉(zhuǎn)化方式為麥胚等農(nóng)副產(chǎn)品資源的深度開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　本論文以麥胚為原料，采用乳酸菌發(fā)酵，制備乳酸菌發(fā)酵麥胚

2、提取物(LFWGE)，通過腫瘤細胞試驗和荷瘤裸鼠試驗研究LFWGE對人HT-29腫瘤細胞的抑制作用及可能的作用機制。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.評價LFWGE的抗腫瘤活性以及優(yōu)化LFWGE的發(fā)酵條件。結(jié)果表明:LFWGE能夠抑制人結(jié)腸癌HT-29腫瘤細胞的生長;從4株乳酸菌中篩選出發(fā)酵麥胚抗腫瘤活性最高的菌株，初步篩選出較優(yōu)的發(fā)酵菌株為乳酸菌(Lactobacillusplantarum Dy-1，CGMCC6016);選擇

3、料液比、乳酸菌添加量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間為主要影響因素，分析得出最優(yōu)發(fā)酵條件為:料液比為1∶7、乳酸菌添加量為4％、發(fā)酵時間為30 h、發(fā)酵溫度為30℃，其中2 mg/mL的LFWGE對腫瘤細胞的抑制率可達69.65％。
　　2.研究了LFWGE對人結(jié)腸癌HT-29細胞抗腫瘤作用。結(jié)果表明:LFWGE能顯著抑制人HT-29腫瘤細胞的生長，且與濃度和時間呈正相關(guān)。4 mg/mLLFWGE分別處理腫瘤細胞24 h、48 h、72 h后

4、，其最大抑制率分別為84.43％、94.13％、94.47％; LFWGE的半致死濃度(IC50)分別為1.29 mg/mL、0.64 mg/mL和0.54 mg/mL。
　　3.研究了LFWGE對人結(jié)腸癌HT-29細胞的抗腫瘤機制。結(jié)果表明:LFWGE可干擾細胞周期，阻滯細胞的G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變;同時LFWGE可誘導細胞凋亡和壞死，且其濃度和作用時間與細胞凋亡和壞死呈正相關(guān);LFWGE也可降低糖酵解過程中HK和LDH的活力、

5、降低戊糖循環(huán)途徑中G6PDH的活力、上調(diào)凋亡因子Caspase-3、Caspase-7、Caspase-8、Caspase-9 mRNA的表達以及Caspase-3蛋白的表達。
　　4.采用裸鼠腹部皮下接種人HT-29腫瘤細胞建立荷瘤裸鼠模型，研究了LFWGE對人HT-29荷瘤裸鼠腫瘤細胞的抑瘤作用。結(jié)果表明:LFWGE具有顯著抑制荷瘤裸鼠腫瘤細胞生長的作用;5-FU組、混合組、LFWGE高劑量組和LFWGE低劑量組的抑瘤率分別為

6、30.08％、47.80％、41.72％和40.70％，其中LFWGE與5-FU協(xié)同作用的抑瘤率最高。
　　5.研究了LFWGE對荷瘤裸鼠臟器和血脂水平的作用。結(jié)果表明:LFWGE能夠保護肝臟和脾臟;且能夠維持荷瘤裸鼠血清中TC、HDL、GLU的含量;同時能夠降低荷瘤裸鼠血清中TG的含量。
　　6.研究了LFWGE對荷瘤裸鼠的抗氧化能力和免疫因子的作用。結(jié)果表明:LFWGE能提高肝臟中SOD、CAT、T-AOC、GSH-PX

7、的活力，減少MDA的含量;LFWGE也可增加血清中免疫因子IFN-γ、 IL-4以及TNF-α的表達。LFWGE的抑瘤作用可能是通過增強機體的抗氧化能力和提高機體的自身免疫力來實現(xiàn)的。
　　7.研究了LFWGE對荷瘤裸鼠腫瘤細胞的抑制機制。結(jié)果表明:LFWGE可調(diào)節(jié)STAT3信號通路，通過上調(diào)Bax、Caspase-3 mRNA的表達以及下調(diào)Bcl-2、CyclinD1的mRNA的表達;同時上調(diào)Bax和Caspase-3的蛋白表達