激光顯微切割從組織切片中提取單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行PCR的方法探討.pdf

1、【目的】探討應(yīng)用激光捕獲顯微切割從石蠟切片和冰凍切片中進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞分離和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)在方法學(xué)上的可行性，為進(jìn)一步將該技術(shù)用于霍奇金淋巴瘤的深入研究奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā坎捎眉す獠东@顯微切割對(duì)46例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生石蠟組織和2例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生冰凍組織，進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞分離和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。采用蛋白酶K消化提取DNA，選取β-珠蛋白基因引物進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)及EB染色技術(shù)，采用凝膠成像圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。首先對(duì)從1

2、00個(gè)淋巴細(xì)胞提取的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果后再逐次遞減，最后對(duì)單細(xì)胞提取的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：各組間差異采用X2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有顯著性?！窘Y(jié)論】證實(shí)了應(yīng)用激光捕獲顯微切割從組織切片上進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞分離和PCR在方法學(xué)上的可行性，說(shuō)明從組織切片中進(jìn)行單細(xì)胞分離和PCR具有較好的擴(kuò)增效率和特異性。組織切片上提取單個(gè)細(xì)胞的PCR擴(kuò)增效率，冰凍組織明顯優(yōu)于石蠟包埋組織；細(xì)胞大小和切片厚度是影響擴(kuò)增效