炎癥促進(jìn)清道夫受體雙敲小鼠組織脂質(zhì)異常積聚和動脈粥樣硬化的分子機(jī)制研究.pdf

1、A類清道夫受體（Scavenger receptor class A，SR-A）是巨噬細(xì)胞清道夫受體家族之一，主要在巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。CD36為B類SR家族成員，是表達(dá)在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上的跨膜糖蛋白受體。SR-A和CD36介導(dǎo)脂質(zhì)內(nèi)吞，在宿主防御功能、增加細(xì)胞間粘附及凋亡細(xì)胞吞噬方面有著重要作用。SR具有粘附動脈血管損害處的單核細(xì)胞，促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化，并能結(jié)合修飾型低密度脂蛋白（Lowdensity lipopro

2、tein，LDL），導(dǎo)致巨噬細(xì)胞攝入超量的膽固醇，形成動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）早期病變的泡沫細(xì)胞。
　　 機(jī)體通過低密度脂蛋白受體（Low density lipoprotein receptor，LDLr）介導(dǎo)攝入血漿膽固醇是細(xì)胞內(nèi)膽固醇的主要來源。它們依賴于細(xì)胞內(nèi)膽固醇的負(fù)反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)，維持胞內(nèi)膽固醇的穩(wěn)態(tài)平衡，即通過固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（Sterol regulatory element bin

3、ding protein2，SREBP2）-固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白（SREBPscleavage-activating protein，SCAP）-LDLr（SCAP-SREBP2-LDLr）途徑，完成細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)平衡的調(diào)節(jié)。
　　 本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：炎癥可以通過干擾膽固醇介導(dǎo)的LDLr負(fù)反饋調(diào)節(jié)可促進(jìn)機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致膽固醇在外周細(xì)胞異常堆積形成泡沫細(xì)胞。
　　 血脂異常是AS發(fā)病的重要危險因素，而

4、具有不受胞內(nèi)膽固醇濃度限制攝入膽固醇特性的清道夫受體在AS形成中起著重要作用，但現(xiàn)有有關(guān)炎癥狀態(tài)下雙敲（Double knockout，DKO）SR小鼠對機(jī)體血脂水平影響及AS形成的分子機(jī)制還不十分清楚。
　　 本研究將擬探討炎癥是否干擾SR DKO小鼠肝臟和主動脈LDLr負(fù)反饋調(diào)控機(jī)制，使組織過量攝入天然LDL形成泡沫細(xì)胞，導(dǎo)致AS形成；比較肝臟和主動脈LDLr負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制在物理炎癥刺激和鼠皰疹病毒-68（（Murine h

5、exes virus68，MHV-68））感染所誘導(dǎo)的炎癥狀態(tài)下，脂質(zhì)沉積和AS形成的差異。
　　 采用SR DKO C57BL/6小鼠探討物理刺激和病毒感染所誘導(dǎo)的炎癥狀態(tài)與機(jī)體脂質(zhì)代謝和AS形成的分子機(jī)制。
　　 隨機(jī)將6-8周齡SR DKO雄性小鼠分為高脂飲食喂養(yǎng)對照組，高脂飲食喂養(yǎng)酪蛋白（Casein）注射組和高脂飲食喂養(yǎng)MHV-68感染組，每組小鼠數(shù)為6只。Casein注射組每2天皮下注射一次，MHV-68感染

6、組每2周進(jìn)行一次腹腔注射MHV-68。實驗時間為14周。結(jié)束實驗時，收集肝臟、主動脈和血清標(biāo)本，儲存于-70℃冰箱中。
　　 檢測小鼠血清炎癥因子濃度：包括血清淀粉樣蛋白A（Serumamyloid A，SAA），腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素6（Interleukin-6，IL-6）。血清脂質(zhì)水平：包括總膽固醇水平（Total cholesterol，TC）、低密度脂

7、蛋白膽固醇（Low densitylipoprotein-cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（High densitylipoprotein-cholesterol，HDL-C）、甘油三酯（Triglyceride，TFG）、肝臟膽固醇酯水平和肝臟主動脈組織形態(tài)學(xué)。用熒光定量RT-PCR檢測肝臟和主動脈組織SCAP，SREBP2和LDLr基因轉(zhuǎn)錄水平及免疫組化檢測其蛋白質(zhì)水平變化。
　　 與對照組相比，兩個

8、炎癥組小鼠血清SAA水平顯著增高，而兩組血清TNF-α和IL-6水平無顯著性差別；兩組小鼠肝臟組織膽固醇酯沉積比對照組明顯增加；Casein注射組血清脂質(zhì)水平明顯降低，而MHV-68感染組血清脂質(zhì)水平卻明顯增高。
　　 Casein皮下注射組主動脈根部沒有發(fā)現(xiàn)明顯的脂質(zhì)斑塊，主動脈根部的冰凍切片進(jìn)行油紅O染色，發(fā)現(xiàn)主動脈內(nèi)膜脂質(zhì)積聚明顯增加，而對照組沒有明顯可見的脂質(zhì)斑塊和脂質(zhì)沉積。而MHV-68感染組肝臟組織切片顯示明顯的脂質(zhì)

9、沉積，主動脈切片可見明顯的AS斑塊。Casein注射組膽固醇攝入負(fù)反饋調(diào)節(jié)基因和蛋白質(zhì)表達(dá)明顯增加，而MHV-68感染組的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)明顯降低。
　　 因此，本研究結(jié)果表明Casein皮下注射所誘導(dǎo)的炎癥能夠打破SR DKO小鼠胞內(nèi)膽固醇負(fù)反饋調(diào)節(jié)的穩(wěn)態(tài)平衡，上調(diào)SCAP-SREBP2-LDLr基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，表現(xiàn)為小鼠的低血脂狀態(tài)和脂質(zhì)在中樞和外周脂質(zhì)代謝組織器官沉積增加；而病毒誘導(dǎo)的炎癥狀態(tài)下調(diào)膽固醇負(fù)反饋調(diào)節(jié)基