醛糖還原酶抑制劑在高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用.pdf

1、目的：研究醛糖還原酶抑制劑依帕司他和杜仲木脂素對(duì)高糖誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)轉(zhuǎn)分化及分化后細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響。為其應(yīng)用于DN腎間質(zhì)纖維化防治提供理論依據(jù)。
　　 方法：將HK-2細(xì)胞在體外與高糖、高糖+不同濃度依帕司他、高糖+不同濃度杜仲木脂素共同培養(yǎng)48 h后，采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的改變；采用real-time PCR法測(cè)定反映轉(zhuǎn)分化指標(biāo)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和E-鈣黏素(E-cadherin)及反

2、映細(xì)胞外基質(zhì)分泌指標(biāo)膠原蛋白Ⅰ(ColⅠ)和纖連蛋白(FN)的mRNA水平；采用Western blot法檢測(cè)α-SMA、E-cadherin、ColⅠ、FN蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、高濃度葡萄糖可誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞形態(tài)由鵝卵石鋪路石樣向梭形長(zhǎng)條樣轉(zhuǎn)變，醛糖還原酶抑制劑依帕司他和木脂素可明顯抑制高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)改變；
　　 2、α-SMA、E-cadherin、FN和ColⅠ mRNA對(duì)葡萄糖誘

3、導(dǎo)具有時(shí)間濃度依賴性。其中α-SMA在50 mmol/L培育48 h后增加最明顯；而FN、ColⅠ的增加則以20mmol/L、48 h最顯著;
　　 3、分別加入1、10μmol/L依帕司他后α-SMAmRNA分別為：2.01±0.28和0.93±0.37，與對(duì)照組(2.38±0.26)相比，表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；不同濃度木脂素能降低α-SMA mRNA表達(dá)(低濃度：2.19±0.33：中濃度：1.93±0.98；高濃度

4、：1.57±0.94)，與對(duì)照組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4、分別加入1umol/L、10umol/L依帕司他后E-cadherinmRNA分別為：2.71±0.86和1.97±0.67，與對(duì)照組(0.94±0.42)相比，表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。0.1mg/L、1mg/L、10mg/L木脂素組E-cadherin mRNA分別為：1.77±0.37、2.63±0.41、3.61±1.05，與對(duì)照組相比，表達(dá)升高，差異

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。50mmol/L甘露醇能顯著升高α-SMA(2.88±1.30，P=0.016)、E-cadherin(2.00±1.29)、ColⅠ(1.62±0.33，P=0.019)、FN(2.10±1.11，P=0.036)mRNA表達(dá)水平，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、葡萄糖可呈劑量及時(shí)間依賴性誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞由上皮細(xì)胞表型向肌成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，促進(jìn)ColⅠ、FN mRNA的表達(dá)；