HDAC4對FOXO1的去乙?；谔悄虿∧I病發(fā)病機制中的作用.pdf

1、目的:糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病最具代表性的并發(fā)癥，也是導致終末期腎病最主要的原因之一。因此，糖尿病腎病的發(fā)病機制是許多科學研究者的研究熱點，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多元醇通路的激活、腎素血管緊張素系統(tǒng)的活化、氧化應激、蛋白激酶C通路的激活、炎性細胞浸潤等均參與了糖尿病腎損傷。
　　組蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases，HDACs)家族是一組進化保守的蛋白酶類，通過維持組蛋白乙酰

2、化與去乙?；钠胶鈦碚{(diào)節(jié)染色體結(jié)構(gòu)和基因表達，與細胞遷移分化，細胞增殖凋亡及炎性反應等過程有密切關(guān)系。越來越多的研究表明HDAC介導的去乙?；碛^遺傳修飾在糖尿病并發(fā)癥發(fā)展過程中起到重要作用。HDACs抑制劑己被發(fā)現(xiàn)對于糖尿病腎病具有治療作用，但是目前可用的抑制劑大多是非選擇性可同時抑制多種HDACs的抑制劑，而實際上不同的HDACs發(fā)揮不同的作用。因此，鑒別不同HDACs在糖尿病腎病發(fā)病中的特異性作用及開發(fā)特異性的HDACs抑制劑至關(guān)

3、重要。足細胞是腎臟固有細胞，是腎小球濾過膜的重要組成部分，影響腎小球濾過率。足細胞的缺失已成為糖尿病腎病典型的早期事件。
　　本研究課題主要對HDAC4在糖尿病腎病中的表達變化及其在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮的作用及機制進行探討。
　　方法:一、動物實驗:選取體重為210-260g的雄性SD大鼠，隨機分為正常對照組和STZ誘導糖尿病腎病模型組。通過大鼠尾靜脈STZ注射誘導成模。飼養(yǎng)14周后，制作腎臟組織石蠟切片和電鏡標

4、本進行PAS染色及電鏡觀察足細胞超微結(jié)構(gòu)確定腎臟損傷程度;用免疫組織化學染色法和免疫組織熒光染色檢測HDAC4的表達和分布:用實時定量RT-PCR、Western blot檢測HDAC4表達的變化;并測定腎臟組織中致炎因子及生長因子水平。
　　二、體外實驗:在足細胞中測定HDAC4的表達變化及其與FOXO1的相互作用和對足細胞凋亡的影響。
　　三、收集糖尿病腎病病人的腎活檢標本。通過實時定量RT-PCR和免疫組織熒光染色方法

5、檢測HDAC4和FOXO1在腎活檢樣本中的表達和變化。
　　結(jié)果:在糖尿病腎病大鼠模型中，發(fā)現(xiàn)腎小球存在明顯的基底膜增厚，足細胞足突融合、致炎因子和生長因子的釋放及腎小球足細胞特異性標記蛋白連續(xù)性的破壞，并存在明顯的生理和生化指標的異常;通過Western blot、免疫組織化學和免疫組織熒光分析，HDAC4在正常腎臟中有表達，而在STZ誘導的糖尿病腎病大鼠模型的腎臟中表達顯著增加，并在臨床糖尿病腎病病人的腎活檢樣本中得到了確認。

6、在體外實驗中，高糖刺激能誘導足細胞HDAC4的表達，而對FOXO1的蛋白水平則無明顯影響;通過免疫共沉淀方法檢測發(fā)現(xiàn)，高糖刺激增強HDAC4與FOXO1的相互作用;Western blot檢測還發(fā)現(xiàn)高糖刺激和HDAC4水平影響FOXO1的乙?；?另外流式細胞術(shù)和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)高糖刺激、HDAC4和FOXO1水平均影響足細胞凋亡及凋亡相關(guān)基因的表達。
　　結(jié)論:HDAC4在糖尿病腎病大鼠模型與臨床糖尿病腎病活檢