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文檔簡介
1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體,均己在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名:燃日雷帕霉素在6#k基多巴誘導(dǎo)的帕金森病細胞及大鼠模型中的神經(jīng)保護作用及其機制研究中文摘
2、要中文摘要【目的】帕金森病(Parkinson’Sdisease,PD)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,線粒體氧化應(yīng)激和神經(jīng)元凋亡在PD的病理機制中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。雷帕霉素(rapamycin)為雷帕霉素靶蛋Et(Targetofrapamycin,TOR)信號通路特異性抑制劑,在一系列神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的病理機制及治療中具有重要的意義。本研究通過雷帕霉素預(yù)處理PD大鼠及細胞模型,揭示其在PD中的神經(jīng)保護作用,并探討其機制。【方法】動物實驗:實驗
3、SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、PD模型組、雷帕霉素低劑量組(005mg/kg/d)、中劑量組(05mg/kg/d)及高劑量紅I(5mg/kg/d)進行雷帕霉素灌胃預(yù)處理。7天后,向模型組和所有雷帕霉素預(yù)處理組大鼠腦部右側(cè)紋狀體兩點定向注射6羥基多E(6一hydroxydopamine,6OHDA)(41tg/gl,21上1/注射點)誘導(dǎo)建立PD大鼠模型,假手術(shù)組大鼠注射生理鹽水作為對照。術(shù)后第25天各組大鼠均用阿撲嗎啡(05mg/kg)誘導(dǎo)
4、旋轉(zhuǎn)試驗,檢測行為學(xué)指標;在造模后第28天,各組大鼠經(jīng)心臟灌注固定,取腦組織進行黑質(zhì)紋狀體酪氨酸羥化酶(Tyrosinehydroxylase,TH)免疫組化染色及透射電子顯微鏡觀察;檢測各組SD大鼠中腦丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSHPX)活性;提取腦組織總RNA后,采用RTPC
5、R方法檢測黑質(zhì)紋狀體內(nèi)Bax、Bcl2和p47p№“等基因mRNA的表達;同時采用westemblot方法檢測黑質(zhì)紋狀體內(nèi)Bax、Bcl一2、細胞色素c以及cleavedcaspase9蛋白質(zhì)的表達。體外實驗:采用不同濃度6OHDA誘導(dǎo)24h后檢測PCI2細胞存活率,建立PD細胞模型。不同濃度雷帕霉素預(yù)處理PCI2細胞3h、6h、12h和24h,100pM濃度6OHDA誘導(dǎo)24h后,使用CCK8細胞計數(shù)試劑盒檢測PCI2細胞不同時間點的
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