成人肝癌組織褪黑素受體的表達(dá)和結(jié)合特性.pdf

1、目的：觀察成人肝癌和癌旁組織有無褪黑素受體(melatonin receptor，MR)的表達(dá)及其細(xì)胞分布特點，明確MR兩種受體亞型(melatonin receptor 1，MT1和 melatonin receptor 2，MT2)在成人肝癌和癌旁組織細(xì)胞表達(dá)的差異性及其意義，為揭示褪黑素(melatonin，Mel)在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供依據(jù)。
　　 方法：成人肝癌手術(shù)病例切除標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋后切片，免疫組化法檢測肝癌

2、和癌旁組織MT1和MT2的表達(dá)及其細(xì)胞內(nèi)分布特點；取成人肝癌和癌旁組織勻漿提取總RNA，采用RT-PCR半定量法分別分析MT1和MT2基因mRNA在肝癌和癌旁組織表達(dá)的差異性；制備成人肝癌和癌旁組織的膜蛋白，采用放射性配體結(jié)合實驗法(radioligand binding assay of receptor，RBA)檢測MR特異性結(jié)合和動力學(xué)特性。
　　 結(jié)果：
　　 1.MR在成人肝癌和癌旁組織的表達(dá)成人肝癌和癌旁組

3、織石蠟切片免疫組化法結(jié)果顯示，成人肝癌細(xì)胞細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中MR兩種受體亞型MT1和MT2蛋白均呈聚集性顆粒狀棕褐色陽性染色，但主要表達(dá)在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核中表達(dá)最少；癌旁組織染色強(qiáng)度明顯低于癌組織，棕黃色陽性染色結(jié)果呈彌散性分布，也主要表達(dá)在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核中表達(dá)最少，分布特點同癌組織類似。
　　 2.成人肝癌和癌旁組織MR受體亞型MT1和MT2的mRNA表達(dá)的差異性提取成人肝癌和癌旁組織的總RNA，RT-PC

4、R半定量分析結(jié)果表明，成人肝癌和癌旁組織均有MT1和MT2表達(dá)，但癌組織MT1和MT2的mRNA表達(dá)水平均明顯高于癌旁組織(P<0.05)。
　　 3.放射性配體結(jié)合法分析MR的結(jié)合特性125I標(biāo)記的褪黑素(125I-Mel)在成人肝癌和癌旁組織的膜蛋白上存在特異結(jié)合位點，肝癌組織和癌旁組織MR特異性結(jié)合最大結(jié)合容量(Bmax)分別為0.29±0.07 pmol·g-1和1.16±0.28pmol·g-1，癌組織明顯低于癌旁組織

5、(P<0.05)；平衡解離常數(shù)(Kd)值分別為48.7±6.5pmol·L-1和26.5±4.6 pmol·L-1，兩組無明顯差異(P>0.05)。動力學(xué)分析表明該特異性結(jié)合為可飽和和可逆性結(jié)合。
　　 結(jié)論：
　　 1.本文首次發(fā)現(xiàn)，成人肝癌和癌旁組織均有MR表達(dá)，包括其兩種亞型MT1和MT2。
　　 2．MR在肝癌和癌旁組織表達(dá)具有差異性，其mRNA的表達(dá)也具有明顯的差異性。
　　 3．成人肝癌和癌旁