肝癌組織腺苷A-,2b-受體的表達(dá)意義及RNA干涉A-,2b-受體對(duì)肝癌細(xì)胞系的影響.pdf

1、本研究旨在探討AdenosineA2breceptor在肝癌組織及正常組織中的表達(dá)差異及其意義，并通過RNA干涉技術(shù)抑制腺苷A2b受體的表達(dá)研究其對(duì)肝癌細(xì)胞系HHCC和HepG2增殖及細(xì)胞周期的影響，從而探討肝癌治療的新方法。 研究方法：采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)AdenosineA2breceptor在肝癌及正常組織中的表達(dá)情況，western-blot方法檢測(cè)在肝癌組織及正常組織中蛋白水平的表達(dá)，Real-timePCR的

2、方法檢測(cè)肝癌組織及正常組織中mRNA的水平。針對(duì)腺苷A2b受體序列設(shè)計(jì)siRNA的靶序列并構(gòu)建載體，建立穩(wěn)定表達(dá)干涉載體的HepG2和HHCC細(xì)胞系，通過RT-PCR，Western-blotting和克隆形成實(shí)驗(yàn)的方法驗(yàn)證干涉腺苷A2b受體效果。采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。MTT法測(cè)定肝癌細(xì)胞系的生長曲線。 研究結(jié)果：免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示AdenosineA2breceptor在肝癌組織切片中表達(dá)明顯增高。Weston-blo

3、t分析顯示AdenosineA2breceptor蛋白表達(dá)強(qiáng)度相對(duì)于β-actin水平，在肝癌組織中明顯高于正常組織。Real-timePCR結(jié)果顯示肝癌組織中的mRNA水平明顯高于鄰近的正常組織。穩(wěn)轉(zhuǎn)pSilencer-3.1-Y(無關(guān)對(duì)照)的細(xì)胞克隆比穩(wěn)轉(zhuǎn)pSilencer-3.1-Mix的細(xì)胞克隆長的大且快。同樣A2b受體蛋白水平相對(duì)于β-actin水平在對(duì)照組和無關(guān)對(duì)照中均高于干涉組，反轉(zhuǎn)錄后A2b受體反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物水平相對(duì)于β-a

4、ctin水平在對(duì)照組中和無關(guān)對(duì)照均高于干涉組。細(xì)胞周期分析顯示轉(zhuǎn)染組更多的HHCC和HepG2細(xì)胞阻滯在G1期，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pSilencer-3.1-Mix的HepG2細(xì)胞系G1期明顯高于未轉(zhuǎn)染組和無關(guān)對(duì)照組，S期明顯低于未轉(zhuǎn)染組和無關(guān)對(duì)照組，G2/M期與未轉(zhuǎn)染組和無關(guān)對(duì)照組無明顯差別。 研究結(jié)論：本研究顯示AdenosineA2breceptor的表達(dá)在肝癌組織中明顯升高，AdenosineA2breceptor有可能成為新的抗