大豆異黃酮對(duì)H22荷瘤小鼠以及人Bel-7402和HepG2肝癌細(xì)胞的作用研究.pdf

1、曾經(jīng)有流行病學(xué)的資料顯示：亞洲居民中性激素相關(guān)腫瘤的發(fā)病率顯著低于歐美國(guó)家，其原因與亞洲居民的飲食中豆類及其相關(guān)食品的日常攝入量較高有關(guān)。目前，大豆及其制品的作用已經(jīng)引世界性的廣泛關(guān)注，大量的離體和整體實(shí)驗(yàn)都表明大豆異黃酮具有抗腫瘤作用。而其中的作用機(jī)制仍在進(jìn)一步探討。 在實(shí)驗(yàn)中首先觀察了大豆異黃酮灌胃對(duì)H22小鼠移植性皮下瘤的作用，繼而又觀察了大豆異黃酮對(duì)該荷瘤小鼠細(xì)胞免疫功能的影響，以明確大豆異黃酮是否通過影響荷瘤小鼠的細(xì)胞

2、免疫功能來發(fā)揮腫瘤抑制作用。離體實(shí)驗(yàn)，我們通過體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株Bel-7402和HepG2，觀察金雀異黃素是否有抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用，然后通過觀察金雀異黃素對(duì)rhHGF引起的肝癌細(xì)胞侵襲性和離散性增加的影響，明確金雀異黃素是否對(duì)肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生抑制作用。 第一部分 目的：觀察大豆異黃酮對(duì)H22荷瘤小鼠移植性腫瘤和免疫功能的作用。方法：取70雄性小鼠，隨機(jī)選60只接種H22肝癌細(xì)胞株，隨機(jī)分為正常對(duì)照(no

3、rmal)組，模型(model)組，50mg／kg組、100mg／kg組、200mg／kg組、400mg／kg組和環(huán)磷酰胺(CP)對(duì)照組，分別用羧甲基纖維素鈉(CMC)對(duì)normal組和model組灌胃，50mg／kg、100mg／kg、200mg／kg、400mg／kg大豆異黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)組灌胃，給予陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射25mg／kgCP。連續(xù)用藥14天，每日記錄體重。用藥第15天，眼球取血，分離血清，ELISA法測(cè)其中IL-6、TNF-a

4、水平；取皮下瘤、胸腺、脾臟，稱重，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。無(wú)菌分離小鼠脾臟淋巴細(xì)胞，檢測(cè)金雀異黃素對(duì)ConA誘導(dǎo)的脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響。結(jié)果：100mg／kg、200mg／kg劑量組的瘤重有顯著性減少(P＜0．05)；400mg／kg劑量組的體重較model組有顯著性增加(P＜0．05)：各用藥組與model組比較，脾臟指數(shù)均沒有顯著性變化，50mg／kg、100mg／kg劑量組的胸腺指數(shù)顯著性增加(P＜0．01)；與model組比

5、較，50mg／kg、100mg／kg、200mg／kg組的IL-6、TNF-a均顯著性升高(P＜0．05，P＜0．01)，脾臟淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率僅在200mg／kg組有顯著性改善(P＜0．01)。結(jié)論：大豆異黃酮可抑制雄性H22荷瘤小鼠移植性皮下瘤的生長(zhǎng)，并對(duì)荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫功能產(chǎn)生促進(jìn)作用，細(xì)胞免疫功能的加強(qiáng)對(duì)抑制皮下瘤生長(zhǎng)產(chǎn)生一定作用。 第二部分 目的：觀察金雀異黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞的增殖和遷移的影響。方法：用不同濃度(

6、0．3125μg／mL、0．625μg／mL、1.25μg／mL、2.51μg／mL、5μg／mL、10μg／mL、20μg／mL、30μg/mL)金雀異黃素作用于對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株Bel-7402和HepG2，分別在48h、72h、96h后，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。用15ng／mLrhHGF誘發(fā)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲，通過體外Transwell法和劃痕法分析5lμg／mL和10μg／mL金雀異黃素對(duì)細(xì)胞侵襲能力和遷移能力的影響。

7、結(jié)果：金雀異黃素對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株Bel-7402和HepG2的增殖有抑制作用，并呈現(xiàn)出一定的時(shí)間和劑量依賴性。與rhHGF誘發(fā)轉(zhuǎn)移對(duì)照相比較，金雀異黃素能夠減輕細(xì)胞離散，劑量依賴性的減少穿過人工基底膜的細(xì)胞數(shù)量(5μg／mL金雀異黃素組，P<0．05；10μg/mL金雀異黃素組，P＜0．01)，劑量依賴性的減少劃痕后分散生長(zhǎng)的細(xì)胞數(shù)(5μg／mL金雀異黃素組和10μg／mL金雀異黃素組，P＜0．01).結(jié)論：金雀異黃素可以抑制體