黃芪多糖輔助抗癌作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討黃芪多糖（Astragalus polysaccharide APS）體內(nèi)外是否具有化療增敏作用及其可能機(jī)制。
　　方法:荷H22小鼠肝癌細(xì)胞株皮下移植瘤小鼠經(jīng)腹腔給以APS及ADM，觀察其體內(nèi)對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響及對(duì)昆明小鼠主要臟器的毒性。用ELISA方法檢測(cè)血清中IL-1a、IL-2、IL-6、TNF-α、IL-10等細(xì)胞因子的表達(dá);用Western blot和熒光定量PCR檢測(cè)腫瘤組織中的P-GP和MDR1 mRNA

2、表達(dá)。體外用MTT法檢測(cè)APS單獨(dú)和協(xié)同化療藥對(duì)H22/ADM敏感性;用Western blot和熒光定量PCR檢測(cè)H22/ADM耐藥細(xì)胞株的P-GP和MDR1 mRNA表達(dá);用R-123攝取實(shí)驗(yàn)研究不同濃度APS對(duì)H22/ADM細(xì)胞P-GP功能的影響。
　　結(jié)果:各實(shí)驗(yàn)組KM小鼠皮下接種部位成瘤率100％，荷H22小鼠肝癌細(xì)胞株皮下移植瘤模型成功;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，在劑量50mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)APS能減輕ADM所導(dǎo)致

3、的KM小鼠體重下降，但對(duì)肝、心、腎、肺重量及其臟器系數(shù)無(wú)明顯影響。在劑量100mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)APS能減輕由AMD導(dǎo)致的胸腺減小，在劑量50mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)APS能減輕由AMD導(dǎo)致的脾臟減小。在劑量50mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)APS聯(lián)用ADM對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)有較強(qiáng)的抑制作用;在劑量50mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)，含APS組IL-1a、IL-2、IL-6、TNF-α等因子表達(dá)增加，而

4、IL-10因子表達(dá)減少，與ADM組比較均有顯著性差異(P＜0.05)，APS具有輔助ADM抗腫瘤作用機(jī)制之一可能與APS增加IL-1a、IL-2、IL-6、TNF-α等因子表達(dá)，而減少IL-10因子產(chǎn)生有關(guān);在APS劑量50mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)MDR1 mRNA和P-GP的表達(dá)隨著APS劑量增加而減小，呈濃度依賴性。與ADM或ADM+RFP組比較，ADM+APS(200 mg/kg)組MDR1 mRNA和P-GP的表達(dá)明顯

5、減小(P＜0.05)。APS能下調(diào)MDR1 mRNA水平，減少P-GP表達(dá)，因此可能增加化療藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度，這也許是APS增強(qiáng)ADM的化療敏感性，輔助ADM抗腫瘤作用的另一機(jī)制。體外研究發(fā)現(xiàn)，在終濃度0.8-500mg/mL范圍，APS對(duì)H22/ADM耐藥細(xì)胞株無(wú)抗腫瘤作用，但可增強(qiáng)5-Fu、DDP、VP-16或CTX等常用化療藥物對(duì)H22/ADM耐藥細(xì)胞株的化療敏感性;APS可以使R-123潴留增加，對(duì)P-GP外排功能表現(xiàn)為抑

6、制作用;APS下調(diào)MDR1 mRNA作用隨APS濃度增加而作用增強(qiáng)，呈濃度依賴性，APS各組MDR1 mRNA表達(dá)隨干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而減少，均具有時(shí)間依賴性;在同一時(shí)間內(nèi)，APS下調(diào)P-GP表達(dá)隨APS濃度增加而增強(qiáng)，呈濃度依賴性，同一濃度的APS下調(diào)P-GP表達(dá)隨干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)(72h＞48h＞24h)，呈時(shí)間依賴性。對(duì)于H22/ADM耐藥細(xì)胞株，APS下調(diào)MDR1 mRNA和P-GP的表達(dá)，抑制P-GP外排功能可能是APS增強(qiáng)耐