黃芪多糖影響巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用及機制研究.pdf

1、背景：前期研究發(fā)現(xiàn):黃芪多糖(Astragalus Polysaccharides，APS)能夠減少脂肪組織中的巨噬細胞（adipose tissue macrophages，ATMs），改善胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和降低血糖水平。ATMs在脂肪組織的炎癥反應中具有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，隨著IR的出現(xiàn)，促炎表達型巨噬細胞會隨著ATMs數(shù)量增加而增加。巨噬細胞遷移到脂肪組織后，脂肪組織釋放IL-1β、IL-

2、6、TNF-α、MCP-1等細胞因子，又正向調節(jié)使巨噬細胞釋放更高水平的TNF-α、IL-6、IL-12。APS對脂肪細胞及巨噬細胞分泌炎性因子的影響，觀察巨噬細胞向脂肪細胞趨化中的作用，又是通過何種機制減少ATMs，需要迸一步探討。
　　目的：通過黃芪多糖干預巨噬細胞和脂肪細胞，進一步揭示黃芪多糖阻止巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用位點及機制，為其應用于臨床調節(jié)免疫提供理論基礎。
　　方法：1.誘導分化細胞:脂肪細胞采用前脂肪

3、細胞3T3-L1細胞株，巨噬細胞采用ANA-1細胞株。使3T3-L1前脂肪細胞接種于培養(yǎng)板，用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)在37℃、5％CO2箱中培養(yǎng);待細胞長滿至80-90％，融合2天后，加含終濃度為0.5mmol/L IBMX、1umol/L DEX和終濃度為10 ug/ml的胰島素的10％胎牛血清高糖DMEM培養(yǎng)48h;48h后換含終濃度為10 ug/ml的胰島素的10％胎牛血清高糖DMEM再培養(yǎng)48h，48h后再換10％胎

4、牛血清高糖DMEM繼續(xù)培養(yǎng)，2天后換培養(yǎng)液一次，誘導分化8至12天前脂肪細胞3T3-L1大于90％呈現(xiàn)復脂滴為脂肪細胞，用油紅O染色鑒定后實驗。
　　2.本研究采用Transwell技術，實驗分三組，每組三個復孔，第一組為空白對照組(NC);第二組為巨噬細胞加黃芪多糖組(AM);第三組為脂肪細胞加黃芪多糖組(AF)。將巨噬細胞種于Transwell上室內，將脂肪細胞種在下室內，采用孔徑8μm的膜，上室中的巨噬細胞可穿過聚碳酸酯膜進

5、入下室。前脂肪細胞3T3-L1誘導成為脂肪細胞后，將0.1 g/L的APS分別加入脂肪細胞培養(yǎng)液和巨噬細胞培養(yǎng)液作為干預因素，空白對照組細胞培養(yǎng)液不加APS;48小時后取出小室，去除培養(yǎng)液，擦拭聚碳酸酯膜上面的巨噬細胞，4％的多聚甲醛室溫固定30分鐘后，結晶紫染色30分鐘后，通過倒置顯微鏡計數(shù)上室底部細胞數(shù)量檢測細胞趨化;再收集每組Transwell上下室中的培養(yǎng)液進行酶聯(lián)免疫試劑法(ELlSA)檢測，檢測其中IL-6、TNT-α細胞因

6、子的表達。
　　結果：1.通過雞尾酒方案成功誘導3T3-L1前脂肪細胞分化，采用油紅O染色進行鑒定。
　　2.Transwell計數(shù)，NC組、AM組與AF組比較， AF組巨噬細胞趨化至下室的細胞數(shù)量顯著低于NC和AM組，與AM組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.ELISA檢測結果顯示:①IL-6: NC組與AF組的下室比較，IL-6的濃度降低(P＜0.05);NC組與AF組的上室、NC組與AM組的上室、