葡萄糖、胰島素對(duì)單核巨噬細(xì)胞系THP-1細(xì)胞功能對(duì)Bmi-1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討不同葡萄糖和胰島素濃度對(duì)單核巨噬細(xì)胞ROS產(chǎn)量、吞噬功能以及細(xì)胞增殖基因多梳蛋白Bmi-1基因表達(dá)情況。
　　方法:1.培養(yǎng)細(xì)胞
　　將細(xì)胞置于含有10％胎牛血清、RPMI-1640（含5.0mmol/L葡萄糖）的培養(yǎng)液里，放置在5％二氧化碳飽和濕度、37℃的孵育箱中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。每2～3天換液或傳代一次，于對(duì)數(shù)生長期收獲細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)到同步化后加入不同實(shí)驗(yàn)處理因素。THP-1細(xì)胞以100ng/L的PMA（12-豆蔻

2、酰及-13-乙酸酯）誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組
　　本實(shí)驗(yàn)分別用不同濃度的葡萄糖對(duì)THP-1細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)(5.0、10.0、20.0mmol/L)，分別加入不同濃度胰島素(20、50、200IU/L)培養(yǎng)48小時(shí)后收獲細(xì)胞，熒光分光光度計(jì)檢測ROS產(chǎn)量、酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞吞噬功能，以及Real-TimePCR檢測Bmi-1基因mRNA，Western Blot檢測蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.葡萄糖、胰島素對(duì)T

3、HP-1細(xì)胞功能的影響
　　(1)糖濃度從5mmol/L到20mmol/L遞增中，THP-1氧化應(yīng)激的能力逐步增高。吞噬功能在糖濃度5mmol/L、10mmol/L明顯高于20mmol/L。
　　(2)添加胰島素可使氧化應(yīng)激水平能力增高，但胰島素濃度變化對(duì)ROS產(chǎn)量無明顯影響。胰島素濃度20IU/L、50IU/L和200IU/L下培養(yǎng)細(xì)胞ROS產(chǎn)量無明顯差異。添加胰島素可使吞噬功能下降，而胰島素濃度從20IU/L遞增至200

4、IU/L，吞噬功能顯著下降。
　　(3)當(dāng)葡萄糖和胰島素共同存在時(shí)，隨著胰島素濃度增高，各個(gè)糖濃度下的ROS產(chǎn)量均增加，ROS水平最高值在糖濃度20mmol/L、胰島素濃度200IU/L時(shí)。在糖濃度10mmol/L情況下，各個(gè)胰島素濃度下吞噬能力均增強(qiáng)，在糖濃度10mmol/L、胰島素濃度20IU/L時(shí)，吞噬功能最強(qiáng);在糖濃度20mmol/L情況下，吞噬能力總體水平高于5mmol/L時(shí)，但仍低于糖濃度10mmol/L的各個(gè)水平。<

5、br>　　2.葡萄糖、胰島素對(duì)THP-1細(xì)胞中Bmi-1表達(dá)的影響
　　(1)葡萄糖濃度在5mmol/L下，胰島素濃度從20IU/L增加至200IU/L時(shí)，Bmi-1表達(dá)下降，但胰島素濃度從50 IU/L增加至200 IU/L時(shí)無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(2)葡萄糖濃度在10mmol/L及20mmol/L下，胰島素濃度從20IU/L增加至200IU/L時(shí)，Bmi-1表達(dá)下降。
　　(3)胰島素濃度在20IU/L及50IU

6、/L下，隨著糖濃度增加，Bmi-1表達(dá)下降。
　　(4)胰島素濃度在200IU/L下，糖濃度從5mmol/L遞增至20mmol/L時(shí)，Bmi-1表達(dá)下降，糖濃度從5mmol/L遞增至10mmol/L時(shí)無顯著差異。
　　(5)葡萄糖和胰島素都對(duì)Bmi-1表達(dá)起顯著作用，兩者是否有協(xié)同作用尚不得而知。
　　結(jié)論:血糖在≤10 mmol/L以及胰島素濃度≤20 IU/L下THP-1細(xì)胞的殺傷能力以及吞噬能力最為平衡。但當(dāng)血糖