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文檔簡介
1、大豆[Glycine max(L.)Merr.]是一種重要的經濟和油料作物,但蟲害卻嚴重影響其成長和發(fā)育,使大豆產量和質量嚴重降低。茉莉酸(JA)作為一種植物激素,在植物的脅迫防御反應中發(fā)揮著重要作用。在茉莉酸生物合成途徑中,丙二烯氧化物環(huán)化酶(AOC)發(fā)揮著重要作用,其決定了JA的立體異構型和生物活性。轉錄因子在植物脅迫中發(fā)揮重要的作用,在不利條件下,它們合成、傳輸和放大信號,進而調節(jié)下游基因的表達。遺傳轉化技術可以生產新穎和創(chuàng)造遺傳
2、多樣性的植物材料,為育種另辟蹊徑,因而在植物改良中有重要作用。所以,利用轉基因技術將具有抗蟲等作用的優(yōu)良基因導入大豆中,使其穩(wěn)定表達,這對大豆抗蟲種質資源的增加具有重要意義。
本實驗首先利用雙酶切-連接的方法將吳倩(2011)和丁長文(2011)證明有抗蟲功能的基因GmAOC3和GmMYC5重新構建植物表達載體pBA002-GmAOC3和pBA002-GmMYC5,其中含有篩選基因bar。再利用農桿菌介導法將其轉入大豆中,實驗
3、結果顯示,單個事件轉化率為0~7.12%,總的轉化率分別為0.4%和0.3%,美國品種Jack優(yōu)于南農88-1,而且整個子葉節(jié)的出芽率和轉化率均高于子葉節(jié)。T0代共收獲22株轉化苗,經PCR和bar試紙條檢測陽性植株為5株,其中4株Jack,1株南農88-1。利用PCR法、bar試紙條法和草丁膦葉片涂抹法檢測T1代轉化植株,共獲得轉GmAOC3大豆6株,轉GmMYC5大豆1株。定性PCR法主要檢測標記基因bar、35S+目的基因部分片段
4、、35S+目的基因+NOS-T。實驗還得出草丁膦的適宜涂抹濃度為150mg/L。
轉GmAOC大豆葉片半定量分析表明GmAOC3在轉基因Jack中表達量明顯高于非轉基因植株,表明在35S強啟動子作用下目的基因得到了高效表達,而在轉基因南農88-1中卻沒有提高,可能是植物體內復雜的調控網絡導致的。轉基因植株中,與茉莉酸代謝相關的基因表達趨勢不明顯,因而還有待進一步研究。轉基因植株熒光定量分析表明,bar基因多為單拷貝,少數為雙拷
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