CYP78A10基因轉(zhuǎn)化大豆的初步研究.pdf

1、大豆[Glycinemax(L.) Merr]是世界上重要的經(jīng)濟(jì)作物，為人類提供了多種豐富的植物蛋白油脂，同時(shí)大豆也是多種功能性醫(yī)療保健用品的重要來(lái)源，其籽粒中蛋白質(zhì)含量達(dá)40％，油分含量達(dá)20％。大豆在人類膳食方面提供了豐富多樣的資源，然而隨著貿(mào)易的逐漸發(fā)展以及人民生活水平的不斷提高，人們對(duì)大豆品質(zhì)的要求也逐步提高。因此對(duì)大豆品質(zhì)進(jìn)行改良，使其具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益，就成為了大豆育種工作者所要研究的目標(biāo)。本研究主要取得以下研究進(jìn)

2、展:
　　1、將屬于細(xì)胞色素P450超家族的，來(lái)源于擬南芥，參與短鏈脂肪酸羥基化反應(yīng)的CYP78A10基因，作為目的基因，成功構(gòu)建載體，并將目標(biāo)載體成功轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105。
　　2、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中:在大豆種子萌發(fā)階段，不同的大豆品種，大豆萌發(fā)率不同，南農(nóng)88-1的萌發(fā)率高于大豆品種JACK;同一個(gè)品種JACK，在不同地方繁種，其萌發(fā)率差異較大，說(shuō)明不同的生長(zhǎng)環(huán)境影響大豆的萌發(fā)率;在共培養(yǎng)階段，用不同的時(shí)間處理

3、，用4天和5天處理，其在恢復(fù)培養(yǎng)階段出芽率基本沒(méi)有差異，為實(shí)驗(yàn)提供了靈活性，超過(guò)5天處理，其在共培養(yǎng)階段就出芽，不利于除菌，因此共培養(yǎng)階段適宜用時(shí)4至5天;通過(guò)移栽初步得到27株抗性苗，通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握了重要的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù):農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌等。
　　3、Dof轉(zhuǎn)錄因子參與植物多種生化反應(yīng)，GmDof11基因就是Dof轉(zhuǎn)錄因子的一種，提取轉(zhuǎn)GmDof11大豆植株T1代株系V3期的大豆葉片DNA，PCR

4、擴(kuò)增檢測(cè)確定陽(yáng)性植株，進(jìn)一步提取陽(yáng)性植株RNA進(jìn)行熒光定量檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)同一株系的兩個(gè)單株的基因表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定，而不同株系之間基因表達(dá)量不同。通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握了DNA提取技術(shù)，RNA提取技術(shù)，RT-PCR技術(shù)和熒光定量PCR技術(shù)。
　　4、轉(zhuǎn)GmDof11大豆T1代農(nóng)藝性狀分析結(jié)果: GmDof11基因的過(guò)表達(dá)，能夠明顯增加大豆植株的分枝數(shù)，說(shuō)明GmDof11基因和分枝數(shù)性狀密切相關(guān);株高性狀上，GmdDof11基因大豆T1代沒(méi)有表現(xiàn)出明