大豆抗蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)移及其轉(zhuǎn)化系統(tǒng)優(yōu)化研究.pdf

1、采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)成功地將Bt基因（cryLA）導(dǎo)入大豆。從發(fā)芽5-7天的大豆無(wú)菌苗切取子葉節(jié)外植體，經(jīng)農(nóng)桿菌感染和共培養(yǎng)后，在選擇培養(yǎng)基上4周左右出現(xiàn)抗性不定芽。將不定芽轉(zhuǎn)移到芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基上，4-6周后再生苗長(zhǎng)至2.5-3cm高。再將再生苗切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，2周左右生根。生根后的再生植株經(jīng)逐步鍛煉移入盆中，所有植株均能正常開(kāi)花結(jié)莢。在移栽成活的8株T_0植株中有7株P(guān)CR檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)；在7個(gè)T_1株系中有4個(gè)株系存

2、在PCR陽(yáng)性植株。取4個(gè)穩(wěn)定遺傳的T_1代株系內(nèi)的陽(yáng)性植株的葉片提取DNA，用地高辛標(biāo)記的Bt基因探針進(jìn)行Southern雜交分析，結(jié)果4個(gè)株系均呈現(xiàn)陽(yáng)性，證明Bt基因已整合到受體大豆的基因組內(nèi)并能傳遞給后代。轉(zhuǎn)基因植株的葉片能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上形成愈傷組織；轉(zhuǎn)基因植株的葉片和莖切片能被X-Gluc不同程度地染色；苜蓿夜蛾幼齡幼蟲(chóng)的接種鑒定，有兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系表現(xiàn)出明顯的抗蟲(chóng)性。這些結(jié)果證明被轉(zhuǎn)的nptⅡ、gus和Bt基因均在轉(zhuǎn)基因植