農(nóng)桿菌介導(dǎo)磷高效轉(zhuǎn)錄因子OsPTF1轉(zhuǎn)化大豆的研究.pdf

1、大豆是我國重要的油料作物之一,也是重要的糧飼作物。磷是大豆生長和發(fā)育的必需元素,土壤中磷多以固態(tài)磷形式存在,植物難以吸收。長期以來,人們一直通過施用化學磷肥來補充土壤中磷素,這雖然使作物產(chǎn)量得到大幅度提高,但也隨之出現(xiàn)了一系列生態(tài)和環(huán)境問題,化肥嚴重,環(huán)境惡化,投入效率下降等。通過轉(zhuǎn)基因方法提高大豆對磷素的吸收和利用是一條可行的辦法。
　　 為了得到能夠高效吸收利用磷素的大豆轉(zhuǎn)基因新品種,本論文以磷高效吸收利用基因OsPTF1為

2、目的基因,通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將OsPTF1基因轉(zhuǎn)入大豆中。目的基因OsPTF1來自水稻基因組,將其與NOS終止子連接之后插入帶有35S啟動子的pCAMBIA1300中,之后連同啟動子和終止子一起切下插入植物高效表達載體pTF101.1中,轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌EHA105得到含有目標基因的工程農(nóng)桿菌。利用本實驗篩選的受體基因型,通過PPT篩選得到16株抗性植株,經(jīng)過PCR分子初步檢測,有3株轉(zhuǎn)化植株整合有OsPTF1外源基因。
　　

3、為提高大豆轉(zhuǎn)化效率,對部分黃淮海地區(qū)大豆品種基因型進行篩選。將含有p1300-221(含(3US)植物表達載體的根癌農(nóng)桿菌對備選的大豆基因型進行遺傳轉(zhuǎn)化,首先對預(yù)培養(yǎng)時間和受體組織部位進行試驗,通過對共培養(yǎng)三天的子葉節(jié)進行GUS染色,鑒定各品種的轉(zhuǎn)化效率,選擇適宜作為轉(zhuǎn)化受體的基因型。備選的大豆品種有:豫豆22、鄭59、商豆1099、鄭04023、鄭04063、Jack共六個品種。研究結(jié)果表明,實驗的大豆品種豫豆22、鄭59、鄭0402

4、3、鄭04063接種Ms培養(yǎng)基后五天裂瓣現(xiàn)象比較嚴重,我們將預(yù)培養(yǎng)時間由傳統(tǒng)5d改進為2-3d,有效的減輕了子葉節(jié)處木質(zhì)化現(xiàn)象和子葉裂瓣現(xiàn)象,GUS染色后比較結(jié)果表明商豆1099和Jack侵染效臬較好,這兩個品種Gus染色效率分別是41.3％和43.2%,經(jīng)過進一步愈傷誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn),這兩個品種愈傷生長情況也較好。我們對受體組織部位也進行了比較,結(jié)果表明,子葉節(jié)比胚尖染色效果好。其次,我們利用嫁接技術(shù)巧妙的解決了分化成苗時間長和生根困難的問題