大豆磷高效轉(zhuǎn)錄因子GmPHR1功能驗(yàn)證與GmPHR1-GmPAP4雙基因轉(zhuǎn)化.pdf

1、磷對(duì)大豆生長發(fā)育至關(guān)重要，土壤有效磷缺乏嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量品質(zhì)。發(fā)掘利用磷高效基因并選育轉(zhuǎn)基因新品種是解決上述問題最經(jīng)濟(jì)有效途徑。本研究在課題組前期已克隆轉(zhuǎn)錄因子GmPHR1，并證實(shí)其在轉(zhuǎn)基因擬南芥中具有提高磷素利用效率基礎(chǔ)上，利用獲得的轉(zhuǎn)GmPHR1大豆新種質(zhì)，研究其在轉(zhuǎn)基因大豆中的生物學(xué)功能;同時(shí)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)及常規(guī)雜交技術(shù)實(shí)現(xiàn)GmPHR1與其它磷高效基因共轉(zhuǎn)化，并探索轉(zhuǎn)基因大豆選擇標(biāo)記去除技術(shù)。主要結(jié)果如下:
　　1.通過PC

2、R擴(kuò)增、DNA測序及Southern blot發(fā)現(xiàn)目的基因在轉(zhuǎn)基因大豆株系中穩(wěn)定整合，通過實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot分析獲得了GmPHR1高效表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系。
　　2.低磷脅迫處理下，分析不同大豆轉(zhuǎn)基因株系磷素利用效率及產(chǎn)量相關(guān)性狀發(fā)現(xiàn)，2個(gè)ZH41-PHR1株系與4個(gè)JD12-PHR1株系葉片磷含量、MDA與H2O2含量、花青素含量與凈光合速率等磷素利用效率相關(guān)性狀顯著優(yōu)于野生型對(duì)照，且低磷條件下的單株莢數(shù)、單株粒

3、數(shù)和粒重等產(chǎn)量性狀也較野生型對(duì)照顯著增加。
　　3.通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化技術(shù)實(shí)現(xiàn)了GmPHR1與GmPAP4雙基因共轉(zhuǎn)化，獲得了轉(zhuǎn)雙基因大豆新種質(zhì)JD12-PAP4-PHR1;同時(shí)利用常規(guī)雜交技術(shù)也實(shí)現(xiàn)了GmPHR1與GmPAP4雙基因共轉(zhuǎn)化，獲得了轉(zhuǎn)有GmPHR1與GmPAP4雙基因新種質(zhì)JD12-AP4-PHR1。
　　4.探明了利用β-雌二醇化學(xué)誘導(dǎo)法刪除轉(zhuǎn)基因大豆LoxP位點(diǎn)間選擇標(biāo)記基因的可行性，利用Cre過表達(dá)法刪