Micro PET-CT腦顯像評(píng)價(jià)左旋多巴、姜黃素治療鼠帕金森病的療效及對(duì)比研究.pdf

1、目的:采用MicroPET/CT腦顯像方法，通過(guò)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及突觸后膜D2受體的顯像來(lái)評(píng)估左旋多巴(L-dopa)、姜黃素(Curcumin)治療鼠帕金森病(Parkinson'sdisease，PD)療效及對(duì)比分析，探討姜黃素、左旋多巴治療帕金森病機(jī)制，驗(yàn)證使用MicroPET/CT腦顯像評(píng)估治療鼠PD療效的可行性，為臨床診斷及治療帕金森病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.偏側(cè)PD模型制備:選取正常成年雄性(S

2、pragueDawley，SD)大鼠(210-240g)110只，10％水合氯醛麻醉，用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦立體定位儀，采用單側(cè)（右側(cè)）雙點(diǎn)注射法將6-羥基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）注射液推入大鼠腦右側(cè)黑質(zhì)致密部（substantianigracompacta，SNC）和腹側(cè)被蓋區(qū)(ventraltegmentalarea，VTA)，制作偏側(cè)PD大鼠模型。
　　 2.行為學(xué)測(cè)試及MicroPET/CT顯像:

3、大鼠術(shù)后3周，腹腔注射阿樸嗎啡（apomorphine，APO）誘發(fā)旋轉(zhuǎn)行為，計(jì)數(shù)30min內(nèi)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)，總轉(zhuǎn)數(shù)≥210r/30min(平均旋轉(zhuǎn)圈數(shù)≥7r/min)為行為學(xué)測(cè)試成功模型。選擇成功PD大鼠模型，行11C-甲基-N-2β-甲基酯-3β-（4-F-苯基）托烷(11C-CFT)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(dopaminetransporter，DAT)顯像，通過(guò)尾靜脈注射顯像劑2-3mCi/0.2ml，每只鼠按注射的先后順序依次行MicroP

4、ET/CT腦顯像，并勾畫(huà)毀損側(cè)（右側(cè)）紋狀體及小腦部位的感興趣區(qū)(ROI)，隔日以同樣的方式行雷氯必利;3，5-二氯-N-[(28-2)-1-乙基-2-吡咯烷基]-2-羥基-6-甲氧基苯甲酰胺(11C-Raclopride，RAC)多巴胺D2受體顯像。11C-CFT顯示毀損側(cè)紋狀體放射性攝取明顯減低，健側(cè)攝取顯像劑正常;11C-RAC顯示模型鼠毀損側(cè)紋狀體放射性攝取較健側(cè)明顯增高。
　　 3.實(shí)驗(yàn)分組及給藥:將66只成功PD模型

5、大鼠隨機(jī)分為左旋多巴組、姜黃素組和自然恢復(fù)組（每組22只）。左旋多巴組:將左旋多巴注射液配成10mg/ml濃度（左旋多巴10mg/kg+芐絲肼2.5mg/kg，溶于0.9％生理鹽水），每日上午9:00-10:00腹腔注射給藥一次;姜黃素組;和左旋多巴組同一時(shí)間點(diǎn)用姜黃素（劑量為100mg/kg，藥物溶液體積為10ml/kg）灌胃一次，連續(xù)8周。自然恢組不做任何處理。
　　 4.實(shí)驗(yàn)評(píng)估
　　 4.1MicroPET/CT

6、顯像:各組大鼠分別行11C-CFT及11C-RAC（隔日）MicroPET/CT腦顯像。觀察大鼠腦毀損側(cè)紋狀體部位對(duì)顯像劑的攝取情況，勾畫(huà)毀損側(cè)紋狀體及小腦部位ROI，測(cè)量其放射性計(jì)數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較。
　　 4.2氧化應(yīng)激:每組大鼠各取10只，10％水合氯醛腹腔注射麻醉后斷頭，在冰盤上取出大腦，剝離出毀損側(cè)腦組織、稱重，生理鹽水制成10％的組織勻漿，離心，取上清液檢測(cè)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathioneperoxid

7、ase，GSH-PX)活力、丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性。
　　 4.3免疫組織化學(xué)染色:每組大鼠各取6只，10％的水合氯醛腹腔注射麻醉后處死，完整剝離出腦組織后對(duì)大鼠腦毀損側(cè)黑質(zhì)紋狀體區(qū)行連續(xù)冠狀石蠟切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測(cè)酪氨酸羥化酶(tyrosinehydrox-ylase，TH)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目的變化情況。
　　 4

8、.4高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,HPLC):每組大鼠各取6只，10％的水合氯醛腹腔注射麻醉后處死，分離出大鼠腦毀損側(cè)紋狀體，生理鹽水制成10％的組織勻漿，離心，取上清，檢測(cè)毀損側(cè)紋狀體內(nèi)多巴胺及其代謝物二羥基苯乙酸(dihydroxyphenylaceticacid，DOPAC)、高香草酸(homovanillicacid，HVA)的含量。
　　 結(jié)果:
　　

9、1.MicroPET/CT顯像毀損側(cè)（右側(cè)）紋狀體/小腦攝取比值的定量分析
　　 1.111C-CFT顯像:①左旋多巴組治療4周組放射性攝取比值高于治療前(P＜0.05);治療8周組比值高于治療前(P＜0.05)及治療4周組(P＜0.05);②姜黃素組治療4周組放射性比值高于治療前(P＜0.05);8周組高于治療前（P＜0.05）及治療4周組(P＜0.05);③自然恢復(fù)組與4周組(P＞0.05)及8周組(P＞0.05)無(wú)差異;④

10、治療4周后各組間比較:左旋多巴組與姜黃素組均高于自然恢復(fù)組(P＜0.05);左旋多巴組與姜黃素組比較無(wú)差異(P＞0.05);⑤8周后各組間比較:左旋多巴組與姜黃素組均高于自然恢復(fù)組(P＜0.05);左旋多巴組與姜黃素組比較無(wú)差異(P＞0.05)。
　　 1.211C-RAC顯像:①左旋多巴組治療4周后與治療前比較無(wú)差異(P＞0.05);治療8周組低于治療前及4周組(P＜0.05);②姜黃素組治療4周后與治療前比較無(wú)差異(P＞0.

11、05);治療8周后低于治療前(P＜0.05)及4周組（P＜0.05）;③自然恢復(fù)組與4周組(P＞0.05)、8周組(P＞0.05)無(wú)差異;④4周組各組間比較:左旋多巴組、自然恢復(fù)組、姜黃素組兩兩比較均無(wú)差異(P＞0.05);⑤8周組各組間比較:左旋多巴組與姜黃素組均低于自然恢復(fù)組(P＜0.05);姜黃素組與左旋多巴組比較無(wú)差異(P＞0.05)。
　　 2.GSH-PX、SOD活性及MDA含量
　　 姜黃素組和左旋多巴組分

12、別與自然恢復(fù)組比較:GSH-PX的活性、SOD的活性升高（P＜0.05），的含量下降(P＜0.05)。左旋多巴組與姜黃素組比較:兩者SOD的活性及MDA的含量無(wú)差異(P＞0.05)，但姜黃素組GSH-PX的活性比左旋多巴組升高(P＜0.05)。
　　 3.TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目
　　 姜黃素組和左旋多巴組分別與自然恢復(fù)組比較:TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增高(P＜0.05)。姜黃素組與左旋多巴組比較:兩者TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)差異(P＞0.05)

13、。
　　 4.DA及其代謝產(chǎn)物的含量
　　 姜黃素組和左旋多巴組分別與自然恢復(fù)組比較:DA及其代謝物的含量增高(P＜0.05)。姜黃素組與左旋多巴組比較:兩者右側(cè)紋狀體內(nèi)DA及其代謝物含量無(wú)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.左旋多巴與姜黃素均可以提高PD大鼠模型毀損側(cè)紋狀體多巴胺的含量，對(duì)神經(jīng)元有保護(hù)作用，治療有效。
　　 2.通過(guò)對(duì)兩種藥物治療前后11C-CFT多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及11